Notch1 信号通路对肺腺癌细胞侵袭和顺铂耐药的影响及其机制

陈立松 ,房 惠 ,王鹤霏 ,何程远 ,盖晓东 ,历 春

（1.北华大学基础医学院分子医学实验室，吉林 吉林 132013；2.中南大学湘雅第三医院妇科，湖南 长沙 410013）

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌的80%～85%，其中肺腺癌占NSCLC 的40%～50%，其发病率逐年上升，且进展快，预后差［1］。肿瘤细胞的侵袭转移和对化疗药物的耐药作用是影响患者生存率的主要原因，也是肺腺癌治疗的难点。Notch1 是Notch 信号通路中的关键受体，在调节机体细胞生长发育和组织再生中均扮演重要角色［2］。研究［3-6］显示：Notch1 信号通路在乳腺癌和卵巢癌等多种肿瘤组织中异常活化，与肿瘤细胞的增殖、侵袭和耐药有密切关联。但Notch1 信号通路在肺腺癌侵袭转移中的作用及分子机制尚未完全阐明，其是否参与化疗耐药作用也尚不明确。因此，本研究通过γ-分泌酶抑制剂（DAPT）阻断Notch1 信号通路，观察肺腺癌细胞在侵袭、血管生成和上皮-间质转化（epithelial mesenchymal transitions，EMT）等方面的变化，以及其在顺铂耐药中的作用，以期为抑制肺腺癌侵袭转移和提高化疗效果提供有效的分子靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞、主要试剂和仪器人肺腺癌细胞株A549 由北华大学基础医学院分子医学实验室保存；DMEM 高糖培养基（美国HyClone 公司），新生小牛血清（杭州四季青公司），Transwell 小室（美国Corning 公司），Matrigel 基质胶（美国BD 公司），基质金属蛋白酶9（metalloproteinase-9，MMP-9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒、小鼠抗人Notch1 和GAPDH 抗体（武汉博士德生物技术有限公司），CCK-8 试剂盒、小鼠抗人波形蛋白（Vimentin）、兔抗人Hes1、N-钙黏附蛋白（N-cadherin）、E 钙黏附蛋白（E-cadherin）和MDR 相关蛋 白1（MDR-associated protein 1，MRP1）（碧云天生物技术有限公司），P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）（武汉爱博泰克生物科技有限公司），顺铂（江苏豪森药业有限公司）。……