轮状病毒感染致腹泻乳鼠模型粪便中志贺杆菌的分离、鉴定及其对人克隆结肠腺癌细胞中紧密连接蛋白表达的影响

于美玲,陆恒章,陶晓莉,程美慧,李永刚,赵 微

（锦州医科大学基础医学院病原生物学实验室，辽宁 锦州 121000）

志贺杆菌（Shigella）即痢疾杆菌，是一类伴随着人类进化而出现的仅有菌毛的革兰阴性短小杆菌［1］，能够引起急性腹泻。正常肠道具有消化吸收食物及蠕动功能、免疫调节、激素分泌和黏膜屏障功 能［2］。近年来研究［3］显示：密封蛋白（Claudins）、闭合蛋白（Occludin）和闭锁小带蛋白1（zonula occludens protein-1，ZO-1）是肠上皮细胞紧密连接方式的重要组成部分，上述蛋白加强肠上皮细胞间的紧密连接，保护肠上皮细胞发挥正常功能，其中密封蛋白1（Claudin-1）最具代表性。人一旦感染致病菌，细菌将通过胃肠道黏膜到达结肠，侵袭肠上皮细胞并向相邻细胞扩散，引起胃肠黏膜屏障功能的破坏。研究［4-5］显示：大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌可以改变Claudins 和Occludin 的表达。志贺杆菌与沙门氏菌均属于肠道致病菌，志贺杆菌是否也能够通过影响紧密连接蛋白来破坏肠上皮细胞，目前尚未有文献报道。本实验采用从轮状病毒感染致腹泻乳鼠模型粪便中分离鉴定的志贺杆菌侵袭Caco-2 细胞，观察志贺杆菌破坏Caco-2 细胞后紧密连接蛋白Claudin-1 和Occludin 的变化，探讨志贺杆菌破坏肠上皮细胞的机制，为肠道共生菌的功能研究奠定基础，同时也为后期辅助临床治疗志贺杆菌感染提供理论依据和数据支持。

1 材料与方法

1.1 实验动物、细胞、主要试剂和仪器

SPF 级昆明系乳鼠10 窝，雌雄不计，5 日龄，每窝7 或8 只与哺乳母鼠同笼饲养，由锦州医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（辽）2019-0003，实验动物伦理学审批号：2 019014；……