纳米银对人骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响

赵忠福，李晓光，邹德勋，孙兰春，姚宏波

（1.齐齐哈尔医学院附属第二医院，黑龙江 齐齐哈尔 161006；2.齐齐哈尔医学院组织胚胎学教研室，黑龙江齐齐哈尔 161006）

0 引言

骨关节假体、支架材料等植入物感染给患者带来严重后果[1]。细菌耐药性持续加剧，生物材料感染率日趋增高[2]。纳米银（Silver nanoparticles，AgNP）能够释放Ag2+，抑制微生物或抑制能量传递[3]，具有抑制细菌、真菌和病毒等活性[4]，被应用于生物材料、医用材料涂层等领域[5]。以AgNPZnO 复合物在骨科植入物表面涂层，能够有效降低感染，扩大了骨科器械的应用，促进了医疗技术的进步[6]。骨髓内含有大量骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC），BMSC 能够分化为骨或软骨，促进骨组织修复和骨折愈合[7]。体外实验发现，BMSC 中添加AgNP，可以促进BMSC成骨分化[8]。虽然AgNP 对BMSC 具有促进分化，抑制细胞感染的作用，但是AgNP 对BMSCs 增殖或凋亡是否产生影响，还鲜见报道。阐明AgNP 对BMSC 增殖、凋亡的影响效果，能够为纳米银在临床应用提供理论基础。

1 材料和方法

1.1 主要试剂和材料

hBMSCs 购自美国ATCC 公司。α-MEM 培养基、胎牛血清购自Hyclone 公司；直径10nm 银纳米溶液、二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO）均购自Sigma 公司；CCK-8 试剂购自日本同仁公司；Triciribine（Akt 抑制剂）购自美国Selleck 公司；RIPA 裂解液、BCA 蛋白浓度测定试剂盒等Western blot 试剂购自上海碧云天生物科技有限公司；人Total-SOD 和MDA 的ELISA 试剂盒均购自美国R&D 公司；小鼠抗人Caspase 3 抗体、小鼠抗人GAPDH 抗体和辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase，HRP）标记的山羊抗小鼠IgG 购自英国Abcam 公司。美国Molecular 公司的Spectra Max190 酶标仪；美国BD 公司的FACSAria Ⅱ流式细胞仪；日本Olympus 公司的IX53 型倒置荧光显微镜。上海天能科技公司的Tanon 6200 发光成像分析系统。……