新疆南疆地区牛乳头瘤病毒1型L1基因克隆及原核表达

张婉琪，赵玉宾，丁繁萍，王青青，王哲红，胡建军*

（1塔里木大学生命科学学院，新疆 阿拉尔 843300）

（2哈密市动物疫病预防控制中心，新疆 哈密 839000）

（3塔里木大学动物科学学院，新疆 阿拉尔 843300）

（4哈密市信访局，新疆 哈密 839000）

乳头瘤病毒(papillomaviruses，PV)是一种常见的传染性病原体，广泛存在于自然界[1]能感染人[2-3]和大多数动物[4-5]。其中，牛乳头状瘤病(Bovine papillomatosis，BP)是由牛乳头瘤病毒(Bovine papillomavirous，BPV)引起的一种引发良性或恶性上皮细胞增生的肿瘤性疾病，也称为疣[6]，主要表现为皮肤、黏膜形成纤维乳头状瘤[7-8]。该病呈世界流行，患畜感染病毒后或因继发感染造成生产性能的下降，严重的恶性肿瘤病变可导致患畜死亡，牛乳头状瘤的传播给养殖业带来严重的经济损失[9]。

目前，已知的BPV基因型至少有24种，另外尚有未分型的假定基因型[10-11]。BPV的基因组主要由早期转录区、晚期转录区和长控区3部分组成，其中L1基因位于晚期转录区具有一定的免疫原性，可作为基因工程疫苗的候选基因。本研究在前期已完成对新疆南疆地区牛乳头瘤病毒1型全长分析及L1基因克隆基础上，以牛乳头瘤病毒1型L1基因为目的基因，设计一对特异引物扩增该基因片段，将获得的目的基因序列构建在pET32a表达载体中，在宿主菌BL21中进行体外诱导表达，以期获得L1蛋白为后续基因工程疫苗的研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

牛乳头状体表赘生物样品来源于新疆南疆某牛场。大肠埃希菌DH5α、BL21（DE3）、原核表达载体pET-32a，均由本实验室自行构建保存。2×Taq pfu PCR Mastermix，pGM-T载体连接试剂盒，普通琼脂糖凝胶回收试剂盒，质粒小提取试剂盒，低分子量蛋白MARK均购自天根生物技术有限公司；……