Ih电流在大鼠臂旁外侧核热敏神经元温敏形成中的作用*

黄 成，綦黄鹏，杨培培，胡红利，赵 曦，全俊如，张 洁△，林友胜△

1. 成都医学院 基础医学院(成都 610500)； 2. 成都医学院 临床医学院(成都 610500)

超极化激活环核苷酸门控性阳离子通道蛋白(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels，HCN)在不同类型神经元上广泛分布，HCN介导的Ih电流可被超极化激活的环核苷酸门控通道阻断剂ZD7288特异性阻断[1]。哺乳动物中，HCN通道蛋白包括4种亚型即HCN1、HCN2、HCN3、HCN4，其中HCN2通道蛋白主要分布于体温调节中枢视前区-下丘脑前部(preoptic-anterior hypothalamus，PO/AH)，HCN2通道蛋白介导的Ih电流具有温度敏感性[2-3]，ZD7288可引起PO/AH区热敏神经元动作电位幅度降低、放电频率减慢、放电间期延长和温度敏感性降低，而对温度不敏感神经元几乎没有作用，提示HCN介导的Ih电流与PO/AH热敏神经元的温度敏感性形成有关[3]。已有研究[4-5]发现，在臂旁外侧核(lateral parabrachial nucleus, LPBN)参与体温调节的中央亚核(central subnucleus of LPBN, LPBc)、背亚核(dorsal subnucleus of LPBN, LPBd)和外亚核(external lateral subnucleus of LPBN, LPBel)均记录到对局部脑温变化敏感的热敏神经元和冷敏神经元，但Ih电流是否与其温敏形成有关尚不清楚。故本实验采用实时定量聚合酶链式反应 (real-time quantitative polymerase chain reaction, real-time qPCR)鉴定雄性SD大鼠LPBN的HCN通道的主要亚型；采用免疫荧光染色的方法，观察HCN通道主要亚型在LPBN的表达和分布；采用脑片膜片钳技术观察温度变化对LPBN热敏、冷敏和温度不敏感神经元Ih电流的影响，以探明Ih电流在LPBN神经元温敏形成中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康雄性SD大鼠(80～300 g)购于成都达硕生物医学科技有限公司。

1.2 real-time qPCR检测HCN1、HCN2、HCN3、HCN4 mRNA表达水平

6只雄性SD大鼠经腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉后，将位于脑桥背外侧的LPBN迅速剥离后并置于RNALater中，采用Trizol法提取组织RNA，用gDNA Eraser去除基因组DNA后，按照逆转录试剂盒(大连宝生物工程有限公司)说明书进行反转录得到cDNA，然后按照文献[6]的方法进行PCR扩增。……