二代测序和荧光原位杂交在骨髓增生异常综合征中的临床价值

韩雪莹，王晓南，王静静，张 暋

(郑州金域临床检验中心有限公司分子医学实验中心，河南 郑州 450016)

骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS) 是一组起源于造血干细胞的异质性髓系克隆性疾病，该疾病的发生、发展、预后和治疗与基因突变和染色体的异常有较大关系[1-3]。对MDS及疑似患者进行分子鉴别诊断是一个重要的检验手段。本研究对郑州金域临床检验中心，同时送检二代测序(next-generation sequencing，NGS)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)2种检测方法的137例MDS标本进行分析，以评估2种检测方法在MDS诊断、预后、治疗中优势和临床价值。

1 资料与方法

1.1 资料收集2019年5月至2020年3月同时进行NGS MDS检测套餐和FISH MDS四项检测的MDS标本137例，其中男64例、女73例，年龄40～80岁，中位年龄56岁。

1.2 方法

1.2.1 NGS实验方法 提取乙二胺四乙酸抗凝血DNA，DNA总量满足1 000 ng。DNA进行酶切打断，末端修复后加A尾和接头。磁珠筛选后用体积分数80%乙醇纯化，制备文库。用设计好的MDS相关基因探针进行文库杂交，并对靶基因进行捕获上机。数据分析时，需先就测序质量、同义突变、临床证实为良性及人群突变频率较高的位点进行过滤。其余位点根据分级证据进行临床意义分级，Ⅰ类突变位点具有强临床意义，Ⅱ类突变位点具有潜在临床意,Ⅲ类突变临床意义未明，Ⅳ类突变为临床意义良性或可能为良性的突变位点，并对分级位点进行临床注释。

1.2.2 FISH实验方法 吸取2 mL抗凝血，2 200 r/min，离心4 min弃上清，加8 mL氯化钾进行低渗处理；加8 mL 固定液固定(蛋白变性硬化，染色体形态固定下来)；加固定液滴片，56 ℃烤30～120 min看细胞数量；洗杂质，加探针，75 ℃ 5 min，37 ℃ 18 h杂交；……