4 型流感病毒疫苗株在MDCK 细胞中增殖条件的优化

江征 ，张国梅 ，张哲罡 ，邓涛 ，刘京 ，吕传硕 ，乐洋 ，马宁 ，周蓉 ，张家友 ，李长贵 ，杨晓明

1.武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究二室，湖北武汉430207；2.中国食品药品检定研究院，北京102629；3.国家联合疫苗工程技术研究中心，湖北武汉430207；4.中国生物技术股份有限公司，北京100029

流感病毒持续威胁着人类健康。据WHO 数据显示，每年约有10 亿人感染流感病毒，并造成300万 ～500 万重症病例和30 万 ～50 万死亡病例［1］。流感病毒属正黏科病毒，其基因组由7 或8 个不连续片段的单股负链RNA 构成。流感病毒目前分为甲、乙、丙、丁4 型，甲型流感病毒又分为不同亚型，如H1N1、H3N2 等；乙型流感病毒分为 Victoria 和Yamagata 两个不同的谱系［2］。目前，每年一度的疫苗接种仍是预防流感的主要有力措施［3］，全球的流感疫苗主要是传统的基于鸡胚基质的裂解疫苗和亚单位疫苗。由于鸡胚基质疫苗存在诸多不足，如病毒的鸡胚适应性突变会降低免疫原性，疫苗的生产依赖于鸡胚的供应，不能快速灵活地应对流感大流行等，近年来出现了基于细胞基质的流感疫苗，并有研究通过改造细胞特性使其更适于流感疫苗培养［4］。基于MDCK 细胞流感疫苗的研究表明，该细胞适用于流感病毒的培养，具有较强的病毒复制能力，适用于大规模培养［5-6］。

流感病毒在感染细胞过程中其表面血凝素（hemagglutinin，HA）需从未活化状态HA0 经胰蛋白酶裂解为具有感染能力的HA1 和HA2［7-9］，而细胞内不存在该类的蛋白酶，因此为提高流感病毒在细胞中培养的病毒滴度，中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室构建了能够稳定表达牛胰蛋白酶原的MDCK 细胞系，即MTY6 细胞。……