2015—2019 年辽宁省麻疹病毒基因型及流行株血凝素基因特征分析

郝爽，王文思，方兴，王艳

辽宁省疾病预防控制中心免疫规划所，辽宁沈阳110005

麻疹病毒（measles virus，MEV）是副黏病毒科，麻疹病毒属成员，为单股负链RNA 病毒。病毒基因组有6 个结构基因，编码6 个主要结构蛋白，分别为核蛋白（nucleoprotein，N）、磷酸化蛋白（phosphoprotein，P）、膜蛋白（matrix ，M）、血溶素蛋白（fusion，F）、血凝素蛋白（hemagglutinin，HA）蛋白和依赖于RNA的 RNA 聚合酶（large protein，L）。其中 H 蛋白能参与病毒感染，与宿主细胞受体吸附［1-2］。病毒感染后产生抗H 抗体，具有中和病毒的作用，因此，H 蛋白是研究麻疹病毒特征的重要蛋白。

麻疹病毒有24 个基因型，但仅有1 个血清型，因此，有效的疫苗接种有望实现消除计划［3-4］，2014年之前，辽宁省监测到的麻疹病毒均为H1a 基因型，本文对2014 年经历麻疹大流行后，2015 — 2019 年辽宁省流行的麻疹病毒基因型及流行株H 基因特征进行分析，探讨其是否发生变化，以期为实现消除麻疹目标提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 麻疹病毒序列来源 本研究中共获取53 条麻疹病毒序列，其中30 条来自2015 — 2019 年分离的麻疹病毒，23 条来自麻疹疑似病例的原始咽拭子或尿液标本。标本的采集处理和病毒分离方法按照《麻疹诊断标准》WS 296-2008、《麻疹诊断》WS 296-2017 的要求进行。

1.2 主要试剂及仪器 Rneasy mini kit 和One-step RTPCR ki（t100，货号：210212）购自德国QIAGEN 公司。

1.3 麻疹病毒RNA 提取及RT-PCR 采用Rneasy mini kit 提取麻疹病毒RNA，用One-step RT-PCR kit 扩增病毒N 基因羧基末端450 bp 核苷酸和H 基因全长1854bp 核苷酸，RT-PCR 引物及反应条件参照文献［5］。

1.4 序列测定及结果分析 扩增后的PCR 产物送至北京赛默飞测序有限公司进行纯化及序列测定。利用MEGA 5.0 和Sequencher-4.0.5 软件对N 基因（450 bp）和 H 基因（1 854 bp）测序结果进行拼接和处理分析，调出GenBank 中WHO 推荐的麻疹病毒N 和H 参考株进行核苷酸和氨基酸比对分析（pdistance 模型），并构建进化树（邻位-连接法，bootstrap检验，抽样次数 500，Kimura-2 Parameter 模型）。……