人类白细胞抗原组织配型基因分型国家参考品的研制

胡泽斌，高飞，刘湘，兰更欣，李丽莉，黄杰

1.中国食品药品检定研究院体外诊断试剂检定所非传染病诊断试剂室，北京100050 2.北京博奥晶典生物技术有限公司，北京101111

人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）基因位于6 号染色体短臂上6p21.3，全长约3 600 bp，由200 多个基因座位组成，是迄今已知基因中等位基因多态性最高的基因复合体［1-2］。HLA 在抗原识别、提呈、免疫应答及调控方面发挥重要作用，是导致移植排斥的主要抗原，也被称为移植抗原［3］，因此，造血干细胞及器官移植均需在移植前进行HLA 配型［4］。

随着测序技术的发展，基于DNA 序列的分型方法基本取代了传统的血清学及细胞学分型方法［5-6］，主要包括低中分辨序列特异性引物方法（PCR sequence specific primer，PCR-SSP）、中分辨序列特异性寡核苷酸探针方法（polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide probes，PCR-SSO）、高分辨基因测序分型方法（sequence-based typing，PCR-SBT）及近年迅速发展的二代高通量测序方法（next generation sequencing，NGS）［7-8］，其中 PCR-SBT 法是 WHO 推荐的HLA 分型方法的金标准。目前，已有多家企业的HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRB1、HLA-DQB1 基因分型检测试剂盒获批上市，同时还有许多企业正在申报此类试剂盒注册。我国目前尚无针对HLA 组织配型基因分型检测相关试剂盒的国家参考品，无法对该类试剂盒进行统一的质量评估，为确保其临床测定结果准确可靠，本实验研制一套涵盖中国人群常见HLA 位点型别信息的HLA 组织配型基因分型国家参考品，以期为临床细胞组织器官移植配型提供保障。

1 材料与方法

1.1 样本 采集45 名志愿者（均已签署知情同意书）5 ～ 10 mL 外周血，置无菌肝素锂抗凝采血管中，2 ～ 8 ℃保存。志愿者外周血基因组DNA 的HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRB1、HLA-DQB1 等 5 个位点的高分辨基因分型信息预先采用金标准PCR-SBT 法获得。……