三叶青总黄酮对大鼠H9C2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

郭永梅，张传林，王 芳

(1.江西医学高等专科学校 药学系，江西 上饶 334000，2.江西医学高等专科学校第一附属医院，江西 上饶 334000)

心肌缺氧复氧 (Hypoxia/reoxygenation，H/R)损伤是缺血性心肌病及心脏手术后出现心衰的一种常见损伤，是世界性难题[1]。21世纪以来，越来越多研究表明，黄酮类化合物有很好的心血管保护作用，可以适当减少心肌H/R损伤及一些炎症因子反应[2]。三叶青是我国特有的药用植物，为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg)，具有清热解毒祛肿等功效[3]。在课题组前期的研究中发现黄酮类化合物存在于三叶青中，其对心血管疾病可能有一定治疗作用。迄今为止，关于三叶青总黄酮对心肌H/R损伤的保护作用少有报道。本研究拟通过建立H/R模型，进而探讨三叶青总黄酮对细胞H/R损伤的保护作用。

1 材料与仪器

1.1 细胞株

大鼠H9C2细胞(采购于中国科学院上海细胞库)。

1.2 药物与试剂

三叶青由上饶市红日农业开发有限公司提供(采自上饶怀玉山)；高糖 DMEM培养基(碧云天生物公司)；胎牛血清(四季青)。

1.3 主要仪器

SW-CJ-1F超净工作台(购于苏州安泰技术有限公司)；二氧化碳细胞培养箱(购于美国赛默飞公司)；荧光定量PCR仪(购于美国Applied Biosystems)；IX71 倒置荧光显微镜(购于日本奥林巴斯)；INSYTE5流式细胞仪(购于美国 MilliporeGAVUA)；Mk3酶标仪(购于美国Wellscan)。

2 方法

2.1 三叶青总黄酮的制备

三叶青总黄酮的提取工艺参考文献方法[3]：三叶青干粉首先用60%的乙醇提取2次，提取时间为80 min和60 min各一次，用D101大孔树脂吸附提取液，洗脱的次序为20% 乙醇洗脱后收集40% 乙醇，洗脱的部分即是三叶青总黄酮，质量分数>80%。