去甲斑蝥素抑制基质金属蛋白酶-9蛋白表达对前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭力的影响

雒向宁，王文娟，李 凯，尤建军，张会波，刘 凯，杜宏宏，王 冬

前列腺癌是最常见的男性生殖系统恶性肿瘤，多见于60岁以上的老年男性。近10年以来，我国的前列腺癌发病率也呈逐年上升趋势，与发达国家比较，我国患者的初诊晚期前列腺癌发病率更高[1]，无法进行根治性手术治疗。绝大多数晚期前列腺癌患者起初对抑制雄激素的药物治疗敏感。然而，经抑制雄激素的内分泌治疗平均2.5年后，上述患者均将转化为激素抵抗性前列腺癌（hormone refractory prostatecancer，HRPC），即对抑制雄激素的内分泌治疗无反应。HRPC病情进展迅速，生存期一般不超过18个月，但其发生机制至今仍未阐明，因此，探索HRPC的发生和进展机制并研发有效的治疗药物成为近年的研究热点。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）现已被证实参与多种肿瘤的浸润、侵袭和远处转移过程。目前已有26种不同的MMPs成员被发现，其中MMP-9能够降解和破坏肿瘤细胞外基质，促进侵袭性伪足形成[2]。去甲斑蝥素（norcantharidin, NCTD）是从斑蝥虫体内提取的斑蝥素的去甲基化类似物[3]。NCTD具有较强的抗癌活性，目前已应用于多种恶性肿瘤的临床治疗。本实验重在研究NCTD能否下调前列腺癌PC-3细胞MMP-9蛋白表达，进而抑制PC-3细胞的侵袭力。

1 材料与方法

1.1 细胞株 前列腺癌PC-3细胞株购自上海细胞所国家细胞库。

1.2 主要试剂 NCTD（美国Aladdin公司，批号D131603-1g），顺铂（美国MCE公司，批号HY-17394），胞浆胞核蛋白提取试剂盒（南京凯基生物公司，批号KGP150），BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天生物科技公司，批号P0010），小鼠单抗β-actin（武汉博士德生物工程有限公司，批号BM0627），鼠单抗MMP-9(美国abcam公司，批号Ab58803)，transwell培养皿（美国Corning公司，批号 658042）。……