6株鸡腺病毒的分离鉴定及序列分析

谢有莲

（山东省临沂市沂南县畜牧兽医局 山东临沂 276300）

鸡的包涵体肝炎是由Ⅰ群禽腺病毒引起鸡的一种急性传染病，其特征性病变表现在鸡的肝脏及骨髓，肝脏组织学切片可见肝细胞内具有包涵体，细胞脂肪病变、外观上肝脏呈肿大、出血甚至坏死，骨髓有时候呈黄色或者灰白色，肾脏充血坏死，该病世界各个国家广泛存在，此病既可以水平传播又可以垂直传播，彻底净化很困难，在我国的发病呈逐年上升趋势。特别是今年4月份始发于山东聊城莘县的禽腺病毒疫情在短短几个月的时间内传遍了山东、河南、安徽、河北、吉林、江苏等地，传播速度之快，涉及范围之广，给我国养鸡业造成了巨大的经济损失，通过对滨州博兴某鸡场病死鸡进行剖检，采集病料，SPF鸡胚接种分离病毒，经PCR鉴定测序分析表明，分离到的病毒主要为Ⅰ群4型禽腺病毒。

1 材料与方法

1.1 材料来源

山东滨州博兴某肉鸡场病死鸡肝脏、肾脏、脾脏等病变组织，SPF鸡胚购自济南斯帕法斯，CEK细胞培养基购自美国Gibco公司，PMD18-T载体，PCR相关试剂，DNA Marker、DNA片段凝胶回收试剂盒购自宝生物大连有限公司，Axygen体液病毒DNA/RNA提取试剂盒购自爱思进生物技术（杭州）有限公司。

1.2 病毒的分离

1.2.1 SPF鸡胚接种分离及鸡胚病变观察采集疑似感染鸡包涵体肝炎的肉鸡肝脏、肾脏组织，用灭菌生理盐水按照1：10比例匀浆研磨、反复冻融3次后，4,000r/min离心10min，上清液经0.22μm过滤除菌后，卵黄囊接种7日龄SPF鸡胚10枚，每枚鸡胚接种0.2mL，置于37℃下孵育，24h后剔除死胚，收取48h后死胚，并收取尿囊液，卵黄及胚体，18日龄后死亡的鸡胚，小心解剖观看病变。……