丹参酚酸B对间歇性高糖乳鼠雪旺细胞损伤的改善*

王蒙 王倩倩 孙连庆

(西安交通大学第一附属医院中医科，陕西 西安 710061)

高血糖引起的血管病变是导致糖尿病患者出现各种慢性并发症的病理基础[1-2]。糖尿病患者体内主要存在稳定性高血糖及间歇性高血糖这两种状态，近年研究表明间歇性高血糖较稳定性高血糖更容易对靶器官造成损伤[3-5]。雪旺细胞是糖尿病周围神经病变(Diabetic Peripheral Neuropathy,DPN)的主要靶细胞，作为周围神经系统特有的神经胶质细胞，对雪旺细胞的保护无疑是治疗DPN的重要手段。我们通过前期研究发现丹参酚酸 B(salvianolic acid B,Sal B)可以抑制高糖诱导的雪旺细胞凋亡[6-7]。在此基础上，本研究以体外培养的乳鼠雪旺细胞为模型，进一步探讨丹参酚酸B对间歇性高糖状态下雪旺细胞的保护作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 选取出生3～5 d清洁级Wistar乳鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司[SCXK(京)2009-0007]。实验过程符合动物伦理要求，并严格按照西安交通大学医学部伦理委员会批准的实验方案进行。

1.1.2 主要试剂与仪器 流式细胞仪(美国BD公司)；丹参酚酸B(天津马克生物有限公司)；MTT(美国Sigma公司)；兔抗鼠S-100抗体、HRP标记二抗(北京中杉金桥公司)；双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA,美国Molecular Probes公司)；线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1,北京嘉美生物)；丙二醛(MDA)测定试剂盒、超氧化物歧化酶 (SOD)测定测试盒(南京建成生物有限公司)；TUNEL凋亡检测试剂盒(美国Roche公司)；兔抗鼠anti-bcl-2、anti-bax、anti-AIF(美国Santa Cruz公司)，兔抗鼠anti-caspase-9、anti-caspase-3(美国CST公司)。

1.2 方法

1.2.1 雪旺细胞的培养、纯化及鉴定 脱颈处死后的乳鼠经75%乙醇浸泡消毒，无菌条件下分离坐骨神经，组织贴块法及差速贴壁法进行培养并去除混杂的成纤维细胞，G-418纯化后S-100抗体鉴定。……