山羊TNNT3基因可变剪切及其对骨骼肌细胞分化的作用

陈媛，蔡禾，李利，王林杰，仲涛，张红平

山羊TNNT3基因可变剪切及其对骨骼肌细胞分化的作用

陈媛，蔡禾，李利，王林杰，仲涛，张红平*

四川农业大学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室，成都 611130

【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T（fast skeletal troponin T3，TNNT3）作为肌钙蛋白(troponin, Tn)家族成员，调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体，分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用，深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因（NM_001314210.1）和牛TNNT3基因（XM_010821200）mRNA序列，使用软件Primer Premier 6.0设计引物，以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料，克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体，利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析；进一步设计实时荧光定量（real-time PCR，RT-qPCR）及半定量引物，研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织（背最长肌（longissimus dorsi muscle，LD）、半膜肌（semimembranosus muscle，SM）、心、肝、脾、肺、肾）和7个发育阶段（胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300）肌肉组织（背最长肌和半膜肌）中表达模式；此外，对转录本进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力，并在山羊骨骼肌卫星细胞（skeletal muscle satellite cells，MuSCs）中过表达，观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化，研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①（NM_001314210.1）CDS区全序列主要含有18个外显子，其中外显子16/17相互排斥，转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因 5个新转录本（—），其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性，而与鱼类和爬行类动物的一致性较低，说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。……