lncRNA CYP17A1-AS1对喉鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

杨喜科，姜平，付莉萍

喉癌是常见的头颈部癌症之一，喉鳞状细胞癌，简称喉鳞癌，是喉癌的主要病理亚型。目前，喉鳞癌的确切发病机制仍不清楚。因此，探索喉鳞癌可能的分子机制，识别特定的生物标志物，以提高病人诊断、治疗和预后是十分必要的。长链非编码RNA（Long non-coding RNA，lncRNA）是一类长度超过200 个核苷酸的非编码RNA，最近的证据强调了lncRNA 作为基因表达和肿瘤发生的关键调控因子 的 重 要 性。 反 义lncRNA CYP17A1-AS1（ENST00000369884）在喉鳞癌组织中表达下调。反义lncRNA 可通过转录正调控或负调控其宿主基因表达。CYP17A1-AS1是细胞色素P450c17（cyto‑chrome P450c17，CYP17A1） 的 反 义lncRNA，CYP17A1 在脑胶质瘤中高表达，与胶质瘤和前列腺癌的进展有关。关于CYP17A1-AS1 对喉鳞癌作用的报道尚不多见。wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin 在喉鳞癌组织中异位表达，lncRNA UCA1可以通过激活wnt/β-catenin 信号传导途径，促进喉鳞癌细胞的增殖，侵袭和迁移。基于此，本研究测定喉鳞癌组织和癌旁正常组织中CYP17A1-AS1 的表达水平，评估CYP17A1-AS1 过表达对喉鳞癌细胞TU686 增殖、侵袭、迁移、凋亡和wnt/β -catenin 信号通路的影响，初步探讨其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 试剂

喉鳞癌细胞TU686购自美国ATCC细胞库，DMEM 培养基（Dulbecco，s modified eagle medi‑um）、胎牛血清购自美国Gibco 公司，Lipofectamine 2000 购自美国Invitrogen 公司，pcDNA-CYP17A1-AS1、pcDNA 购自上海权阳生物科技有限公司。实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测相关试剂盒购自日本Takara 公司，Matrigel 基质胶购自美国BD 公司，异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶（annexin Ⅴ-fluorescein isothiocyanate/ propidium iodide，AnnexinⅤ-FITC/PI）细胞凋亡检测试剂盒购自江苏凯基生物公司，蛋白提取试剂盒购自碧云天生物技术研究所，β 肌动蛋白（β-actin）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloprotease-2，MMP-2）、B 细胞淋巴瘤/白血……