微小RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

向从明，陈友干，孙承文，张笑，吴国胜

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一，目前前列腺癌发生及转移的分子机制尚未阐明。miR‑NA 是一种非编码小分子RNA，其可介导参与细胞增殖、凋亡等生物学行为，从而影响肿瘤发生及发展。 微 小RNA-15a-5p（microRNA-15a-5p，miR-15a-5p）在乳腺癌细胞中表达下调，并可促进细胞增殖、迁移及侵袭。通过生物信息学分析显示蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白（protein disulfide isom‑erase A6，PDIA6）可 能 是miR-15a-5p 的 靶 基 因，PDIA6 在非小细胞肺癌细胞中表达上调，并可促进非小细胞肺癌发展进程。因此，本研究主要研究miR-15a-5p在前列腺癌组织中的表达及其对病人前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学过程的作用，及其可能相关的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

标本来源：选取2018 年2 月至2019年3月江南大学附属医院泌尿外科接受治疗的前列腺癌病人50例，所有病人均经病理学确诊为前列腺癌，年龄（66.59±6.35）岁，将手术切除的前列腺癌组织、癌旁组织置于-80 ℃超低温冰箱保存。前列腺癌DU145细胞由美国ATCC公司生产；Triolz和荧光定量检测试剂盒由北京天根生化科技有限公司生产；miR-15a-5p 寡核苷酸模拟物（miR-15a-5p mimics）及阴性对照mimic NC 序列（miR-NC）、PDIA6 小分子干扰RNA（si-PDIA6）及其阴性对照（si-NC）、miR-15a-5p 特异性寡核苷酸抑制剂（antimiR-15a-5p）及阴性对照inhibitor NC 序列（antimiR-NC）由广州锐博生物科技有限公司生产；Lipo‑fectamine2000 由美国Invitrogen 公司生产；MTT、二甲基亚砜（DMSO）由美国Sigma 公司生产；兔抗人PDIA6抗体由武汉维克赛思科技有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 实验分组

DU145 细胞接种于6 孔板（3×10个/孔），按照脂质体法分别将miR-NC、miR-15a-5p mimics、si-NC、si-PDIA6、miR-15a-5p mimics 和pcD‑NA、miR-15a-5p mimics 和pcDNA-PDIA6 转染至DU145细胞，分别记作miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR-15a-5p+pcDNA-PDIA6 组。转染6 h 后更换为含有胎牛血清的培养基，继续培养48 h。……