肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响

杨柳易，王蒙，周圆，王琛

实验研究

肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响

杨柳易，王蒙，周圆，王琛

上海中医药大学附属曙光医院，上海中医药大学中医肾病研究所，上海市中医临床重点实验室，上海 201203

观察肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响，探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。体内实验以5/6（A/I）手术构建慢性肾衰竭大鼠模型，随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组，进行相应干预8周后，取肾组织行PAS染色观察肾脏病理变化，Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达，免疫组化检测α-SMA、己糖激酶（HK）2蛋白定位，紫外法检测肾组织HK活性，比色法检测肾组织乳酸、丙酮酸浓度；体外实验以白细胞介素（IL）-1β刺激大鼠肾成纤维细胞NRK-49F构建NRK-49F增殖活化模型，细胞分为空白组、IL-1β组、IL-1β＋肾衰Ⅱ号方低剂量组（200 µg/mL）、IL-1β＋肾衰Ⅱ号方高剂量组（400 µg/mL）、IL-1β＋2-脱氧-D-葡萄糖组（10 mmol/L），Western blot检测NRK-49F细胞α-SMA、增殖细胞核抗原（PCNA）、纤维连接蛋白（FN）、HK2蛋白表达，比色法检测细胞培养基乳酸浓度，葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基葡萄糖浓度，免疫荧光检测HK2蛋白表达。体内实验：与假手术组比较，模型组PAS染色提示肾间质糖原含量增加，肾小球、肾小管形态异常；α-SMA蛋白表达明显升高（＜0.01），肾组织乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显升高（＜0.01）。与模型组比较，中药组和西药组肾组织病理变化改善，α-SMA蛋白表达、乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显降低（＜0.05，＜0.01）。体外实验：与空白组比较，IL-1β组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显升高（＜0.05，＜0.01）；……