基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对分枝杆菌液体培养系统菌种鉴定的临床研究

杜岩青，秦中华，张丽霞

不同种分枝杆菌感染疾病的临床症状、影像学特征十分相似，但在致病性、药物敏感性、治疗方案上常截然不同，若无准确的病原学证据，可能造成误诊,因此快速、准确到种甚至亚种的病原学鉴定对于分枝杆菌的确诊及治疗具有重要意义。

当前国内外实验室主要采用液体、固体2种方法进行分枝杆菌的培养，固体培养既为传统的罗氏培养法耗时较长，需4～6周。液体培养系统使用的自动化培养系统如BactecTMMGITTM960(BD Diagnostics, Sparks,Maryland,USA)，1～3周即可检测到分枝杆菌的生长，较传统的固体培养更为敏感和快速，但无法区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌，仍需进一步进行鉴定。

对于分枝杆菌的诊断，传统的生化鉴定方法操作复杂，影响因素多，耗时长，结果不准确，目前已不常使用，分子诊断技术的方法主要是比较同源基因或序列差异的方法[1]，由于方法复杂和成本高在临床上较难常规开展。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight massspectrometry，MALDI-TOF MS) 作为兴起的一种新的蛋白质组学检测技术，已广泛应用于临床常见细菌的鉴定，其鉴定原理是对微生物的核糖体蛋白组分析，从而形成不同的指纹图谱，区分微生物。核糖体蛋白提取的质量直接影响质谱鉴定结果，由于分枝杆菌细胞壁坚韧、脂质含量高，不易裂解获得足量蛋白质，因此标本需要前处理以获得足量的蛋白质，然而不同的前处理方法会影响到本方法的鉴别能力[2]。应用MALDI-TOF MS检测分枝杆菌鉴定国内外虽有相关研究报道，但前处理方法多局限固体培养培养[3-4]。……