甘肃连城自然保护区大型真菌资源研究*

刘金喜，张国晴，蒋长生，朱学泰**

（1．西北师范大学生命科学学院，甘肃 兰州 730070；2．甘肃连城国家级自然保护区管理局，甘肃 兰州 730070）

甘肃连城自然保护区位于甘肃省的中部，兰州市的西北部[1]，东经 102°26′～102°55′，北纬 36°33′～36°48′[2]，总面积 47 930 km2，地处祁连山山地与黄土高原的过渡地带，气候属祁连山山地—陇中北部温带半干旱区，降雨少，光热适中，年平均气温7．4℃，年蒸发量1 542 mm，年均降水量419 mm[3]。其特殊的地理位置和生态环境，为大型真菌提供了适宜的生长条件。研究通过对该保护区分布的大型真菌进行3年的系统调查，以此为基础对该保护区的大型真菌资源进行研究和评价。

1 材料与方法

1.1 制定采样计划

由于大型真菌子实体的生长受到温度、湿度等多种条件的影响，研究结合相关文献资料[4-5]，根据大型真菌的分布特点，制定采样计划并确定采样路线。

1.2 标本采集

按照采样计划实施采样，做好采样记录。拍摄清晰的生境照片，制备分子材料，保存完整的子实体标本以备后续分析鉴定；记录采集地海拔高度。此外，对当地大型真菌商贸情况以及民众对野生食用菌的食用情况进行调查并记录。

1.3 鉴定与分类

1.3.1 形态学研究

观察子实体大小、菌盖、菌柄、菌环、菌托的特征以及菌褶和菌管的疏密、深浅、分叉、颜色、伤变等宏观形态；用显微镜观察其孢子、囊状体、菌髓、子实层等显微结构。

1.3.2 分子生物学鉴定

用CTAB法或真菌DNA提取试剂盒提取标本总DNA，对ITS或nrLSU等片段进行扩增；PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测，扩增成功的PCR产物送北京奥科鼎盛生物公司进行测序，扩增失败的重新进行扩增或提取总DNA。……