肌醇依赖酶1内切酶活性抑制剂STF⁃083010对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

詹 峰，蒋 超，张 楷，龚伟达，王 荇，张 云

江苏大学附属宜兴医院肝胆腹腔镜外科，江苏 无锡 214200

肝脏缺血再灌注（ischemia⁃reperfusion，IR）损伤是肝部分切除术和肝移植术后常见的并发症，其发病机制复杂。该过程涉及到活性氧的释放，炎症细胞的激活，炎性介质的产生等诸多因素［1］。近年来的研究发现内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）反应能加重炎症反应，是导致肝脏缺血再灌注损伤的重要病理机制之一［2］。STF⁃083010 是肌醇依赖酶1（inositol⁃requiring enzyme 1，IRE1）核糖核酸酶特定抑制剂，可特异性阻断IRE1⁃剪切型X⁃盒结合蛋白1（spliced X⁃box binding protein 1，sXBP1）信号通路，有效降低sXBP1 的表达［3］。本研究旨在探讨STF⁃083010 预处理对肝脏缺血再灌注损伤的影响。

1 材料和方法

1.1 材料

30 只健康雄性C57BL/6 小鼠，6～8 周龄，体重15～20 g，购自南京医科大学实验动物中心，无特殊病原体（SPF）环境下饲养，自由进食、饮水。动物实验已获得动物伦理委员会的批准。STF⁃083010（Selleck 公司，美国）；丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）检测试剂盒（北京达科为）；TRIzol（南京诺唯赞）、肿瘤坏死因子（tu⁃mor necrosis factor，TNF）⁃α、白细胞介素（interleu⁃kin，IL）⁃6和IL⁃1β引物（Invitrogen公司，英国）；逆转录试剂盒（TaKaRa 公司，日本）；ChamQ 通用型SYBR Green qPCR Master Mix（南京诺唯赞）；TUNEL染色试剂盒（武汉赛维尔）；RIPA 裂解液（上海碧云天）；sXBP⁃1抗体（Proteintech公司，美国）、转录因子C/EBP 同源蛋白（C/EBP⁃homologous protein，CHOP）抗体、GAPDH 抗体、兔源性二抗（CST 公司，美国）；超敏ECL发光液（苏州新赛美）。

1.2 方法

1.2.1 动物模型

将30只小鼠随机分成3组，每组10只。①假手术组（sham组）：小鼠仅接受腹腔麻醉和开、关腹操作；②肝缺血再灌注组（IR组）：小鼠在建立IR 前30 min，按30 mg/kg 腹腔注射生理盐水；③STF⁃083010 预处理+肝缺血再灌注组（IR+STF⁃083010组）：小鼠在建立IR 前30 min，按30 mg/kg 腹腔注射STF⁃083010。

肝脏缺血再灌注模型建立具体步骤：小鼠术前12 h禁食，不禁饮，5%水合氯醛腹腔注射，麻醉成功后，取小鼠腹部正中切口，用生理盐水棉签明确分离肝左、中叶后，使用无损伤血管夹夹闭通往肝左叶和肝中叶的肝蒂，此时可见缺血肝叶色泽改变，关腹。……