miR-145通过调控PDCD4表达抑制缺氧/复氧所诱导的心肌细胞凋亡

张朝华，刘旭帮，朱银川，汤建民

急性心肌梗死（AMI）是临床上常见的急性重症疾病。随着人们生活节奏加快、饮食结构改变以及人口老龄化的影响，AMI的发病率呈逐年升高趋势，现已高达45～55/10万[1,2]。AMI患者常诱发心肌缺血再灌注（MIRI），引起心肌细胞凋亡，心肌细胞凋亡是导致AMI患者并发慢性心力衰竭，且死亡的主要原因[3,4]。

miRNA是长度约22个核苷酸的非编码单链RNA分子，其可通过与mRNA的3'互补结合而调控相关基因的表达，在细胞增殖、分化和蛋白表达上发挥重要的调控作用[5,6]。目前，越来越多研究表明，miRNA不仅作为诊断AMI的生物标志物[7]，且参与调控心肌缺血再灌注引起心肌细胞凋亡，是治疗心肌缺血再灌注的潜在靶点[8]。此外研究表明，miR-145不仅被发现在急性冠脉综合征患者的血浆中低表达[9]，且在急性心肌梗死大鼠心肌组织中低表达[10]。然而，miR-145表达对心肌缺血再灌注引起的心肌细胞损伤的影响还未知。本研究建立缺氧复氧（H/R）诱导的H9c2细胞体外模型以模拟心肌缺血再灌注引起的心肌细胞损伤，不仅研究了miR-145表达对H/R诱导的心肌细胞凋亡的影响，还初步探讨了其内在的分子机制。

1 材料与方法

1.1 实验试剂RNAiso plus和PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser购买自日本TARAKA公司；胎牛血清、DMEM高糖培养基、transwell小室、Lipofectamine™ 2000转染试剂均购买自美国ThermoFisher SCIENTIFIC公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购买自中国碧云天生物技术有限公司；GoTaq® qPCR Master Mix购买自中国Promega公司；qPCR引物、miRNA及程序性细胞死亡因子4（PDCD4）序列均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；pcDNA3.1质粒购买自中国云周生物科技有限公司。……