青霉菌液体发酵及发酵液效价测定

奚逢源，薛长艳，季芳琴，屈晓璐

[1.台州技师学院（筹），浙江 台州 318001；2.台州职业技术学院，浙江 台州 318000]

青霉素从发现到应用对人类的生命征途起到了巨大的作用[1]。青霉素不是单一的结构，又被称为青霉素G[2]、青霉素钠等。青霉素分为天然青霉素和半合成青霉素，两者的生产方法有着天壤之别。例如青霉素G的生产较为简单，只需要通过培养青霉菌孢子培养物来进行发酵，再提取青霉素精制就可以获得钠盐[3]。半合成青霉素则是通过裂解工艺得到的6APA与多种合成有机酸发生酰化反应而得。青霉素的发酵难以实现在线测量关键变量，所以发酵过程的控制是一个较大的难题。现如今，对青霉素发酵的优化重点就在于如何减轻污染以及对发酵过程中的相关生理特性进行优化，尽量降低发酵成本[4]。在青霉素多年的研究中，其生产工艺也在不断完善[5]。本实验首先对青桔霉进行摇瓶浅层液态发酵生产以获取青霉素，其次对获得的发酵液进行效价测定来观察发酵液中青霉素的抑菌活性[6]。通过简单的实验来学习效价测定的方法和青霉素对微生物的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 实验菌种

（1）菌种：青桔菌，保藏于台州职业技术学院。

（2）指示菌：金黄色葡萄球菌。

（3）用具及试剂：培养皿（90 mm），试管，锥形瓶 （250.0 mL），移液枪，移液管，无菌水，生理盐水，pH为6.0的磷酸缓冲溶液（PBS），氨苄青霉素钠盐（1 667.00 U/mL）。

1.2 仪器设备

超净台、摇床、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、离心机等。

1.3 培养基

营养琼脂（Nutrient Agar，NA）培养基：牛肉浸膏 3.00 g/L，氯化钠1.00 g/L，蛋白胨10.00 g/L，琼脂20.00 g/L，pH为7.4～7.6。……