根瘤农杆菌T-DNA插入介导的烟曲霉耐药突变菌的分子机制

龙南彪

(邵阳学院 医学技术学院，湖南 邵阳， 422000)

烟曲霉是一种分布广泛的条件致病真菌，在免疫缺陷的个体中，由烟曲霉导致的肺部感染具有较高的病死率[1]。近年来，虽然医疗技术发展迅猛，但免疫缺陷的人数却逐年增多，烟曲霉发病率也呈上升之势[2]。与细菌不同，烟曲霉致病机制主要与其占位生长相关。影响烟曲霉生长的因素诸多[3]，主要有：(1)食物获取。包括碳源、氮源、无机盐(铁、钙、锌、铜以及磷酸盐等)。(2)宿主环境。如低氧、pH变化、氧化应激、热刺激等。(3)细胞壁结构。如黑色素(melanin)、葡聚糖、疏水蛋白、GAG(galactosaminogalactan)等。(4)其他因素。如生物膜及混合感染等。

目前，治疗曲霉病的药物主要有两类。一类是唑类药物，其机制是阻断细胞膜的主要成分——麦角固醇的生物合成；另一类是阻断β-1,3 glucan合成[4]。有数据显示，临床分离的烟曲霉菌株中3.2%具有单重或多重耐药[3]。烟曲霉对唑类药物耐受的机制主要与其药物靶点Cyp51A位点突变以及启动子区插入突变有关[5-6]。相关研究显示，烟曲霉对唑类药物的耐药性可能与线粒体功能紊乱以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生密切相关[7]。

通过用根瘤农杆菌T-DNA介导的插入突变构建了一个含1 805株烟曲霉的突变体库,并从中筛选到16株唑类药物耐药突变株[8]。本研究挑取了第7号突变株(M7)进行了T-DNA插入位点鉴定、相关基因敲除以及耐药表型试验。研究发现，M7耐药表型并不是因为其插入位点相关基因Afu5g08910突变引起，而是由Cyp51A在第54位Gly错义突变所致。

1 材料与方法

1.1 实验材料

菌株：烟曲霉菌株Δcyp51A由南京师范大学张弛博士馈赠；……