早老素在日本血吸虫生殖发育中的作用

杨旭晗，杨 菲，沈际佳，刘 淼

血吸虫病是热带地区高发的寄生虫病之一，虫卵是其传播和致病最重要的因素。血吸虫雌虫性器官的发育成熟和产卵必须通过雌雄虫合抱方可完成。可能原因为雌雄合抱在虫体内启动了特殊基因的表达，这些基因可能参与了调节血吸虫雌虫的性成熟和产卵过程。但是，雌雄合抱对雌性生殖系统发育的影响及分子机制尚未完全确定。

早老素 (presenilin, PS) 在多种动物体内均可表达，具有多种生物学作用。但其在血吸虫虫体生殖发育中的作用尚未有报道。该研究首先运用荧光定量PCR技术分析早老素基因在血吸虫发育各个阶段的表达情况，随后通过RNA干扰(RNA interference，RNAi)成虫的早老素基因，初步证实早老素在日本血吸虫生殖系统发育中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雌性6周龄昆明鼠由安徽省实验动物中心提供，阳性钉螺(含日本血吸虫尾蚴)购自湖南省血吸虫病防治研究所。

1.2 主要试剂

Tween-20及DEPC购自美国Solarbio 公司； TRIzol购自美国Invitrogen 公司； ProteinaseK、LipofectamineRNAiMAX Reagent、荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green)、10×PCR buffer、dNTPmix及逆转录试剂盒(PrimeScriptRT reagent Kit)购自日本TaKaRa&Clontech公司；三抗及引物委托上海生工生物公司合成； RPMI1640、无添加剂的M199培养基、OPTI-MEM及胎牛血清(FBS)、糖原购自美国Gibco公司；其余试剂均为国产分析纯。

1.3 日本血吸虫雌雄虫的收集

准备加满纯净水的10 ml锥形瓶，并将感染日本血吸虫的钉螺放置于瓶中，于 25 ℃、通风条件下光照4 h，然后收集从钉螺中逸出浮于水面的血吸虫尾蚴。每只昆明鼠裸露腹部皮肤，给予80只左右的尾蚴经腹部皮肤感染，昆明……