基于单细胞拉曼技术鉴定非结核分枝杆菌的方法研究

阮 真, 朱鹏飞, 张 磊, 陈荣泽, 李洵融, 付晓婷,黄正谷, 周 刚, 籍月彤, 廖 璞，2*

1.重庆医科大学检验医学院，临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆 400016 2.重庆市人民医院检验科，重庆 400013 3.中国科学院青岛生物能源与过程研究所单细胞中心，山东 青岛 266101 4.重庆市公共卫生医疗救治中心，中心实验室，重庆 400036 5.青岛星赛生物科技有限公司，山东 青岛 266101

引 言

非结核分枝杆菌(non-tuberculosis mycobacteria, NTM)作为分枝杆菌属中除结核分枝杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosiscomplex, MTC)和麻风分支杆菌以外的分枝杆菌，截至目前共发现近200种，致病能力各不相同[1]。分枝杆菌具有相似的生物学性状：多生长周期长(1～8周)、有抗酸性。NTM导致人类感染无论是临床症状还是其培养后的菌落常与MTC难以区分，导致其易被误认为MTC进行诊治，但常规的MTC治疗方案对NTM可能没有效果，还会诱导耐药菌的产生[2-3]。近年来NTM的分离率不断增加，许多国家和地区在结核病的发病率不断下降的同时NTM的感染率和耐药率却在不断上升[4-5]。NTM感染的诊断和治疗依赖于病原学依据[6-7]。由于存在生物安全风险，常规实验室多未对分枝杆菌进行鉴定。目前，基因测序是NTM鉴定的金标准，但操作相对繁琐，需在专业实验室进行检测。商品化试剂盒用于鉴别NTM其敏感性受标本质量影响较大，仅能用于常见NTM鉴定，无法对新物种检测[8-9]。当下亟须一种能快速、准确区分和鉴定NTM的新方法来帮助临床诊断NTM感染。

单细胞拉曼光谱技术(single-cell Raman spectroscopy，SCRS)是基于拉曼光谱分析原理实现检测物质结构的新方法，通过收集检测物的生物学信息(包括蛋白质、核酸、脂质等)组成生物体特有的“指纹图谱”，并结合不同的分析方法实现对检测物的快速、准确区分[10-11]。……