阿达木单抗电荷异构体的分离和表征

袁俊杰, 高 栋, 胡 锋, 杨 勇, 张海涛, 王海彬

阿达木单抗电荷异构体的分离和表征

袁俊杰1,2, 高 栋2, 胡 锋2, 杨 勇2, 张海涛1, 王海彬2

(1. 浙江大学 药学院, 浙江 杭州 310058; 2. 浙江博锐生物制药有限公司, 浙江 台州 318000)

为探索电荷异构体的结构基础及其对生物学功能的影响，利用阳离子交换层析法分离制备了阿达木单抗的4个电荷异构体组分，通过液质联用进行结构表征，考察了生物学功能。结果表明，制备的电荷异构体具有较高的纯度、稳定性和相同的氨基酸序列；酸性变异体主要与聚集体、碎片、N-糖唾液酸化、脱酰胺水平升高和氧化比例降低有关；碱性变异体主要由聚集体、碎片、C-末端赖氨酸缺失不完全和氧化比例降低引起；电荷异质性未影响TNF-α结合活性和细胞死亡抑制活性。因此，电荷异构体不能被定义为杂质。

阿达木单抗；电荷异构体；异质性；结构；功能

1 前 言

单克隆抗体(单抗)在治疗肿瘤和自身免疫性疾病方面具有良好的专一性和显著的疗效[1]。N-糖基化、氨基酸翻译后修饰和空间构象的改变会使单抗在电荷和疏水性方面表现出异质性[2-3]。其中，电荷异质性在生物创新药的开发和生物类似药的相似性评价过程中被视为关键质量属性[4-6]。毛细管区带电泳、等电聚焦、阳离子交换色谱(cationic exchange，CEX)和阴离子交换色谱等都可以实现电荷异构体的分离[7-10]。在CEX中，早于主峰洗脱的称为酸性峰(表观等电点更低)，晚于主峰洗脱的称为碱性峰(表观等电点更高)[11]。酸性变异体通常源于N-糖唾液酸化、天冬酰胺(Asn)脱酰胺修饰、糖化、三硫键、半胱氨酸化和蛋白碎片等[12]。……