水溶性香豆素荧光底物的制备及在液滴数字式检测中的应用

匡小军，伊京伟，方晓霞，赖东梅，徐 宏

（1.上海交通大学生物医学工程学院,Med-X研究院,2.上海交通大学医学院,中国福利会国际和平妇幼保健院,上海200030）

随着人们对生命科学研究的日益深入，生物标志物的检测受到了越来越多的重视.由于受分析灵敏度的限制，目前传统的检测方法仅能检测到十分之一的人类已知蛋白［1］，致使大量与疾病相关的低丰度生物标志物无法得到临床应用，因此开发高灵敏的检测方法至关重要.相较而言，液滴数字式检测方法（如数字式酶联免疫检测，ddELISA）的检测灵敏度极高、隔离分区不受限，是较有可能应用于临床的低丰度生物标志物检测技术［2，3］.该技术采用结合有特异抗体的磁性微球捕获待测蛋白，通过稀释样本，使待测蛋白数量小于磁性微球数量.根据泊松分布，每个磁性微球表面至多捕获一个待测蛋白，并形成单磁球-单靶标蛋白的复合物；将形成的磁球-蛋白复合物或空白磁球逐一分隔到液滴分区微反应器中，此时每个分区根据内含物不同，分为仅有一个微球-待测蛋白复合物的“阳性”分区、仅有一个微球（不含待测蛋白）的“阴性”分区和仅有酶反应底物溶液的“背景”分区［4］.通过结合在待测蛋白上的酶催化分区中的底物分子产生荧光信号，使“阳性”分区的信号强度区别于“阴性”分区，进而统计“阳性”分区和“阴性”分区的数量，结合泊松分布计算即可得到微球捕获的待测蛋白的绝对数目，从而实现待测……