RASSF6介导凋亡与自噬提高奥沙利铂对胃癌细胞的化疗敏感性

厚玉瑾，郭 婷，赵岳阳，陈 萍，刘新兰

（1.宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科，宁夏银川 750004；2.宁夏医科大学临床医学院，宁夏银川 750004；3.宁夏回族自治区人民医院肿瘤科，宁夏银川 750004）

胃癌（gastric cancer,GC）目前已成为全球发病率第五位、死亡率第三位的肿瘤[1-2]，早期GC治疗首选手术。但因GC早期缺乏典型症状、体征，60%～70%患者初诊时已出现远处转移，5年生存率不足30%[3]。尽管新的化疗药物不断问世，但许多患者仍存在耐药，是预后不良的主要原因。因此，明确GC生物学行为，寻找其发生发展相关基因逆转耐药，对提高GC治疗效果具有重要的临床意义。RASSF6作为RASSF家族（Ras association domain family,RASSFs）成员，参与细胞生长、迁移、凋亡，具有Ras效应子和肿瘤抑制子的特性[4-5]。本课题组前期研究表明，RASSF6基因在GC组织中低表达，且与GC浸润深度、分化程度、淋巴结转移及分期有关[6]。本研究进一步验证RASSF6基因对GC细胞增殖、迁移、凋亡及对奥沙利铂化疗敏感性的影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料GC细胞系（BGC-823）购自中科院上海细胞库，RASSF6兔抗人蛋白抗体（ab220111)购自Abcam公司，β-actin兔抗人蛋白抗体（20536-1-AP）、GAPDH兔抗人蛋白抗体（10494-1-AP）、P62兔抗人蛋白抗体（55274-1-AP）、LC3兔抗人蛋白抗体（14600-1-AP）和Beclin-1兔抗人蛋白抗体（11306-1-AP）购自武汉三鹰生物技术有限公司，RASSF6慢病毒购自上海汉恒生物工程有限公司，奥沙利铂购自中国罗欣药业。

1.2 RASSF6慢病毒细胞转染及效果验证BGC823细胞培养于含100 mL/L胎牛血清+1%青链霉素的DMEM培养液，37℃、50 mL/L CO2、95%湿度恒温培养箱中培养，每24 h换液1次，细胞贴壁达80%左右进行传代培养。

转染：正常培养的BGC823细胞用2.5 g/L胰酶消化，PBS溶液离心洗涤3次，调整细胞密度为106/mL，接种于6孔板中，每孔105个细胞，24 h换液后转染，每孔加入1 mL慢病毒转染液（DMEM+慢病毒，MOI值1∶50），6 h时换正常培养液，72 h荧光显微镜观察，计算转染率。……