阿托伐他汀对白蛋白诱导的HK-2细胞凋亡的影响及机制初探

陈艳霞，黄 翀，秦晓华，房向东，涂卫平

(南昌大学第二附属医院肾脏内科，南昌 330006)

慢性肾功能衰竭中肾小管细胞的凋亡不如急性肾功能衰竭中突出。然而，肾小管细胞凋亡是肾脏功能不全的关键特征，蛋白尿在慢性肾病的进展中起着关键作用。蛋白尿可诱导人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells，HK-2)细胞的凋亡。在慢性肾功能衰竭中，很难确定在规定的时间范围内因凋亡而死亡的HK-2细胞的绝对数量，但HK-2细胞凋亡对肾功能衰竭的促进作用已被广泛接受[1]。尿液中的白蛋白被认为是危险因素，对于如何缓解蛋白尿引起的肾功能衰竭问题的研究有着重要意义，因为它们可能成为控制慢性肾病新的治疗靶点。目前，阿托伐他汀(atorvastatin，ATO)对于白蛋白诱导的HK-2细胞的凋亡影响尚不明确，因此，本研究旨在探讨ATO对白蛋白诱导的HK-2细胞凋亡的影响，并对其可能的作用机制进行探讨。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

HK-2细胞来自美国ATCC细胞库；ATO购自美国辉瑞制药有限公司；RhoA/ROCK信号通路抑制剂(Y27632)购自美国Sigma公司；HK-2细胞培养基DMEM/F12培养基购自美国Hyclone公司；HK-2细胞培养液中的胎牛血清购自美国Gibco公司；流式细胞检测仪为美国Beck-man公司产品。RhoA、ROCK1及内参(β-actin)引物序列见表1。

表1 RhoA、ROCK1、β-actin引物序列

1.2 实验细胞培养及分组

体外培养HK-2细胞，将培养到85%～90%的HK-2细胞随机分为7组：空白对照组(A组)、白蛋白诱导组(B组：5 mg·mL-1白蛋白)、ATO组(C组：10-8mol·L-1ATO)、低浓度ATO+白蛋白诱导组(D组：10-10mol·L-1ATO+5 mg·mL-1白蛋白)、中浓度ATO+白蛋白诱导组(E组：10-9mol·L-1ATO+5 mg·mL-1白蛋白)、高浓度ATO+白蛋白诱导组(F组：10-8mol·L-1ATO+5 mg·mL-1白蛋白)、RhoA/ROCK信号通路阻断剂组(G组：10 μmol·L-1Y27632+5 mg·mL-1白蛋白)；……