幽门螺杆菌阳性胃黏膜病变和胃癌中miR-93的表达及与临床病理特征的相关性研究

白忠秀，王 艳，孟红军

幽门螺杆菌(H.pylori)携带者慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)及肠上皮化生(IM)风险增高，胃癌(GC)患者中H.pylori阳性比例也较高[1]。有研究认为，H.pylori感染是胃黏膜癌前病变发展为GC的重要诱发因素[2]，但机制尚不清楚。miRNA在肿瘤恶性行为中具有重要的调控作用，介导恶性肿瘤的发生及发展。有研究显示，miRNA及其靶基因是H.pylori相关病变的重要调控因子[3]。miR-93在胃癌组织中表达上调[4]，但在H.pylori不同状态下miR-93表达程度可能不同。本研究检测miR-93在H.pylori不同状态下GC、CSG、CAG和IM等胃黏膜病变中的表达水平，并分析H.pylori不同状态下GC中miR-93与临床病理特征的关系，目的在于评价miR-93在H.pylori阳性GC中的表达及意义，为进一步探讨miR-93与H.pylori在胃癌发生及发展中的作用及机制提供前期实验数据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2017年1月—2019年6月我院CSG患者12例、CAG患者12例、IM患者12例及GC患者23例胃镜标本，23例GC均经过手术治疗。病变组织中H.pylori阴性及阳性例数分别为CSG(5/7)、CAG(6/6)、IM(4/8)及GC(8/15)。GC患者术中切取0.5 cm3肿瘤组织及距离肿瘤2 cm以上的癌旁正常组织,置于液氮罐中保存。本研究经本院医学伦理委员会审核通过。

1.2研究方法

1.2.1细胞培养：低分化胃癌细胞HGC-27及胃正常黏膜上皮GES-1细胞(购自中科院上海细胞库)采用贴壁培养，在沈阳医学院科学试验中心进行培养及传代。选择生长数量>5×105的原代细胞进行传代。细胞培养条件为5% CO2、95%空气、37 ℃。

1.2.2H.pylori感染HGC-27细胞及GES-1细胞：H.pylori标准菌株NCTC11637购自美国ATCC，0.2～0.5 ml培养液溶解活化细菌冻干粉，后接种在2个平板上进行复苏，培养基为改良布氏培养基，培养条件为10% CO2、3%～5% CO2、37 ℃。取融合度75%以上的对数生长期细胞，以细胞︰菌落为1︰100的比例感染各组细胞，未感染细胞为对照组，继续培养24 h后行qRT-PCR检测miR-93表达。