牛病毒性腹泻病例的血清学诊断

连小丽

（甘肃省定西市安定区畜牧兽医局高峰畜牧兽医站 743000）

牛病毒性腹泻病毒（BVDV）隶属于黄病毒科，是瘟病毒属成员之一，主要引发病毒性腹泻-黏膜病，以致病牛免疫耐受能力降低、屡次出现感染、母牛流产风险明显增高、奶牛产奶量下降，对牛只健康生长造成严重影响。病畜分泌物、排泄物及血液等均可能成为本病的传染源，既往调查发现[1]，牛病毒性腹泻在全国范围中均可发生，有广泛流行性特征，对牛养殖户经济效益形成较明显的影响。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清

2019 年在内蒙古某奶牛场随机选择300 头牛，采集尾静脉血液，常规离心、分离血清后待检。已知本牛场所有牛既往均没有接种过BVDV 疫苗。

1.1.2 检测试剂

牛病毒性腹泻抗体（BVDV-Ab）、抗原（BVDV-Ag）检测试剂盒。

1.1.3 主要仪器设备

高速台式离心机（5810）、恒温培养箱（INE 500）以及酶标仪（Elx808IU）等。

1.2 检测方法

采用酶联免疫试验（ELISA）方法检测BVDV-Ab、BVDVAg，严格依照试剂盒说明书上指示内容进行操作。

（1）把试样对应的微孔按序编号，各板均要设置阴性、阳性对照孔，空白对照孔，其中空白对照孔不添加试样于酶标试剂，其他各步操作一致。

（2）将50μl 阴性、阳性对照分别添加到阴、阳性对照孔，而后先把样品稀释液40μl 添加到待测样品孔，而后再加入10μl 待测样品。通过加样把试样添加到酶标板孔底，尽量做到不触碰孔壁，轻摇使其混合均匀。

（3）采用封板膜进行封板处理后，将其安放在37℃恒温箱内，连续孵育30min。

（4）小心撕掉封板膜，弃除液体，甩干，各孔加满洗涤液，静置30s 后弃除，以上操作反复进行5 次，拍干。……