外源性神经生长因子对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜组织的保护作用及其机制

张 新, 巨朝娟, 金 鑫, 熊朝晖, 赵 燕

（河北医科大学第一医院眼科，河北 石家庄 050031）

近视是指在放松状态下，平行光线经眼球屈光系统后聚焦在视网膜前的屈光状态。近年来，近视的发生率在我国呈上升趋势，其中病理性近视的发生会引起巩膜、视网膜和视神经病变，最终导致视觉损伤，严重影响青少年的正常生活［1-2］。Wnt/β -catenin 信号通路是机体中重要的信号通路，与动物胚胎组织发育、干细胞分化和细胞增殖密切相关［3］。前期研究［4-5］显示：形觉剥夺性近视（formdeprivation myopia，FDM）动物模型中巩膜成纤维细胞的Wnt/β-catenin 信号通路被激活。神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是神经细胞生长调节因子，通过促进乙酰胆碱的合成激活Wnt/β-catenin信号通路，从而减轻胆碱能神经元的功能障 碍［6］。研究［7-9］显示：部分活性 因子如成 纤 维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）、转化生长因子（transforming growth factor，TGF）和胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor，IGF）等参与近视的发生发展过程。但目前国内外对NGF的研究较少，尚无关于NGF对FDM动物Wnt/β-catenin 信号通路影响的相关研究报道。本研究建立豚鼠FDM 模型，给予外源性NGF 干预，观察NGF 对FDM 的保护作用，并阐明其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要试剂和仪器雄性豚鼠48只，2月龄，体质量100～130 g，购自中科生物制药股份有限公司，动物使用许可证号： SYXK（冀）2019-001。适应性饲养1周，饲养条件：室温25℃±2℃，相对湿度45%～55%，昼夜交替饲养，自由进水和摄食。复方托吡卡胺滴眼液和盐酸奥布卡因滴眼液（参天制药株式会社），NGF（美国Sigma公司），TRIzol 试剂（美国Invitrogen 公司），鼠抗糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3 β，GSK-3β）抗体和兔抗β-连环蛋白（β-catenin）抗体（美国Abcam 公司），鼠抗β-actin 抗体（南京金斯瑞生物科技有限公司）。……