Survivin和Ezrin蛋白在乳腺癌组织中表达及病理意义

林红霞 韩鹭 刘效伊

(1佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007；2深圳市龙岗区妇幼保健院)

乳腺癌的发生发展与转移是一个多基因参与、多个步骤完成的复杂过程，涉及肿瘤细胞自身生长优势、细胞间黏附能力的降低、癌细胞对细胞外基质和基底膜的降解与破坏、细胞骨架重构引起细胞运动与迁移、细胞因子诱导的癌细胞器官特异性定向归巢及肿瘤血管和淋巴管生成等诸多因素〔1〕。这些因素是互相关联和相互影响的。研究提示与乳腺癌相关的各种基因及某些蛋白表达水平的变化对于乳腺癌的诊断均有不同程度的表达意义〔2〕。本研究通过免疫组化(SP)法检测乳腺良性病变、乳腺导管内癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺小叶原位癌、乳腺浸润性小叶癌Survivin和Ezrin的蛋白表达，探讨Survivin和Ezrin在乳腺癌组织中的表达水平及病理意义。

1 材料与方法

1.1材料 收集佳木斯大学附属第一医院和佳木斯中心医院肿瘤科和病理科2018年5月至2019年3月就诊临床资料完整的乳腺疾病患者活检组织及选用了部分库存符合要求的病理石蜡标本，其中乳腺良性病变组(乳腺纤维瘤、乳腺增生症)20例、导管内癌组20例、浸润性导管癌组20例、小叶原位癌组20例、浸润性小叶癌组20例，且均经病理学证实。按WHO 2012年乳腺肿瘤分类标准进行病理学分级，TNM分期。

1.2方法 兔抗人Survivin多克隆抗体、兔抗人Ezrin多克隆抗体及二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购自福州近新生物工程有限公司。采用SP，热抗原修复，SP色按说明书操作，苏木素复染。

1.3结果判定 福州迈新生物技术开发有限公司提供的阳性对照，以磷酸盐缓冲液(PBS)分别代替一抗、二抗作为阴性对照，以细胞质或细胞膜出现黄色和棕黄色为阳性，高倍镜下选择组织部位(一般选定5个高倍视野)计数1 000个细胞，根据染色强度和阳性细胞比例的综合评分进行半定量分析。如：染色强度的判断(A)无显色为0，浅黄色或黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例(B)：B<5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分)。Survivin或Ezrin蛋白表达水平综合评价值=A×B。

1.4统计学方法 采用SPSS23.0软件进行t检验及Spearman相关性分析。

2 结 果

2.1乳腺良性病变组织和乳腺癌组织中Survivin和Ezrin的表达水平 乳腺良性病变组Survivin水平(0.80±0.20)均显著低于导管内癌组(4.35±1.23)、浸润性导管癌组(4.65±1.22)、小叶原位癌组(4.55±1.47)、浸润性小叶癌组(4.80±1.47，均P<0.05)；导管内癌组、浸润性导管癌组、小叶原位癌组及浸润性小叶癌组Survivin水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。乳腺良性病变组Ezrin水平(3.40±1.05)均显著低于导管内癌组(6.10±1.48)、浸润性导管癌组(11.20±1.48)、小叶原位癌组(6.00±1.30)、浸润性小叶癌组(11.80±1.32，均P<0.05)；导管内癌组Ezrin水平显著低于浸润性导管癌组(P<0.05)；小叶原位癌组Ezrin水平显著低于浸润性小叶癌组(P<0.05)。见图1。

图1 各组Survivin及Ezrin的表达(DAB，×400)

2.2乳腺癌组织中Survivin和Ezrin表达水平与患者一般临床特征的关系 乳腺癌组织Survivin水平与年龄、肿瘤直径、TNM分期及月经情况均无关(均P>0.05)，乳腺癌组织Ezrin水平与年龄及月经情况均无关(均P>0.05)，与肿瘤直径及TNM分期相关(均P<0.01)。见表1。

表1 乳腺癌组织中Survivin和Ezrin表达水平与患者临床特征的关系

2.3乳腺癌组织中Survivin和Ezrin的表达水平的相关性分析 导管内癌组和小叶原位癌组乳腺癌组织中Survivin和Ezrin表达水平均无相关性(r=0.298，r=0.366，均P>0.05)；浸润性导管癌组和浸润性小叶癌组乳腺癌组织中Survivin和Ezrin表达水平呈正相关(r=0.489，0.495，均P<0.05)。

3 讨 论

Survivin是迄今为止克隆出的最小凋亡抑制因子(IAP)，也是目前发现凋亡抑制作用最强的因子，能特异性的与作为细胞凋亡的核心机制末端效应细胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3和caspase-7结合，通过在细胞内与微管的聚合和解聚，抑制其过表达引起细胞凋亡，使一些转化细胞逃避机体免疫系统的监视而无法清除，从而促进肿瘤细胞的增殖和扩散〔3，4〕。Survivin主要在胚胎和发育阶段的胎儿组织中表达，但是在正常成人组织中并没有表达，这也说明Survivin的组织分布有特异性〔5〕。

研究提示Survivin是判断恶性肿瘤预后的重要因素之一，在细胞转化的早期Survivin就有表达，并且参与了细胞的恶变过程，与恶性肿瘤的发生、发展有密切关系〔6，7〕。本研究提示Survivin的异常遗传学改变参与了乳腺上皮细胞的恶性转化过程，Survivin的异常高表达，可能使细胞的正常凋亡机制受损，从而导致有恶变潜能的细胞不断的积累，从而导致乳腺癌的发生、发展，与乳腺癌的进展密切相关。

Ezrin为膜细胞骨架连接蛋白，属于ERM家族成员之一，ERM蛋白的C末端与细胞骨架的actin相连，N末端通过与细胞表面的黏附分子Cadherin、CD44等相连接，调节细胞与细胞，细胞与间质黏附性而影响恶性肿瘤细胞侵袭性等生物学行为〔8〕。Ezrin主要集中在富含肌动蛋白的细胞微绒毛和细胞膜的皱襞中，并参与上皮细胞的膜动力学。在生理状态下，Ezrin参与细胞表面结构，例如伪足、微绒毛等的形成，并参与细胞间、细胞与基质之间的黏附、信号传导、细胞运动〔9〕。微绒毛能增加细胞的表面积，参与细胞与细胞的结合，它给予细胞游走能力和捕获能力，细胞的胞质内Ezrin蛋白通过自己作为支架分子来集中信号分子，并通过羧基末端区和肌动蛋白结合，共同聚集在细胞胞质膜的内面，通过氨基末端与细胞的胞质膜受体的胞质尾区相互作用，优先作用于细胞表面突出(如微绒毛、丝足、微小突起、局部的黏附物和膜皱褶)。本研究提示Ezrin可能在正常组织中定位于细胞表面，而在癌变组织中存在于胞质和胞浆中，Ezrin参与细胞与细胞间及细胞与基质之间的黏附、信号传导、细胞运动，从而导致乳腺癌的发生和发展和转移。

PI3K和Ezrin蛋白在结直肠癌的发生发展、侵袭、转移中起着重要作用〔10〕。在肿瘤细胞的转移和浸润过程中Survivin和Ezrin都有一个共同的信号通路——磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和Akt途径，该信号通路可活化Ezrin促进肿瘤的转移和浸润，且参与Survivin的调控，促进细胞进入分裂周期，抑制细胞凋亡〔11〕。