H5、H7亚型禽流感母源抗体对蛋雏鸡首免日龄的影响

钱明珠，王申锋*，王荷香，谢军强，王德刚，朱红标

（1．河南农业职业学院牧业工程学院，河南郑州451450；2．郑州航空港经济综合试验区社会事业局，河南郑州450019；3．汤阴县畜牧兽医总站，河南安阳456150；4．河南健恒动物药业有限公司，河南郑州451476）

禽流感（avian influenza，AI）是由A型流感病毒（AIV）引起的禽类的烈性传染病，临床上根据病毒致病力强弱不同将禽流感分为高致病性（HPAI）、低致病性（LPAI）和无致病性3种[1]。近年出现数起H5、H7亚型高致病性禽流感感染人的报道，禽流感对养禽业和人类公共安全造成巨大威胁[2]。研究表明，目前流行的H5亚型AIV主要为clade2.3.4.4和clade2.3.2.1分支毒株，其中优势流行毒株为clade2.3.4.4[3-4]。2019年投入使用的疫苗（Re-11+Re-12株、rSD57株+rFJ56株）与当前流行AIV毒株的抗原性匹配度更高，在预防H5亚型禽流感方面发挥积极作用[5]。禽流感可引起蛋鸡产蛋性能下降，造成巨大的直接经济损失。目前尚无针对禽流感的特效治疗药物，必须通过疫苗接种进行控制[6]。禽类可通过卵黄获得母源抗体，从而产生天然的被动免疫，但母源抗体具有一定的时效性，会随着时间推移不断衰减直至消失。接种禽流感疫苗可使其产生主动免疫应答，但母源抗体会对主动免疫应答产生影响，所以，应根据雏鸡母源抗体的消长规律确定禽流感疫苗最佳首免时间[7-8]。本试验对郑州市某种鸡场的蛋雏鸡H5、H7亚型禽流感母源抗体消长规律进行了研究，以确定该鸡场H5、H7亚型禽流感的首免时间，为种鸡场制定科学合理的禽流感免疫程序提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

1日龄农大3号蛋雏鸡母雏500只，饲养于郑州某种鸡场。

1.1.2 疫苗与试剂

疫苗：重组禽流感（H5+H7）三价灭活苗（H5N1Re-11+Re-12株、H7N9Re-2株、H5N2）购自哈尔滨维科生物技术有限公司。

试剂：禽流感病毒血凝抑制试验抗原H5亚型（Re-11株）、（Re-12株）、H7亚型（Re-2株）以及禽流感病毒血凝抑制试验阳性血清H5亚型（Re-11株）、（Re-12株）、H7亚型（Re-2株），均购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 父母代蛋种鸡的免疫

父母代蛋种鸡免疫接种重组禽流感（H5+H7）三价灭活苗（H5N1Re-11+Re-12株、H7N9Re-2株、H5N2），首免日龄为14日龄，二免时间在45日龄，三免时间在105日龄。接种剂量按标签说明，常规进行抗体检测。

1.2.2 饲养管理

育雏鸡舍取暖、照明、通风设施完善。蛋雏鸡入舍前彻底清扫，密闭熏蒸消毒2次。蛋雏鸡入舍后，先饮少量温水，再饮糖水，3 h后开食。第1 d温度控制在35℃左右，湿度65%~70%，以后每天降低0.5℃，一周后降至31℃。试验期间通风与光照按饲养标准设定。喂水喂料2次/d。每2 d使用百毒杀和戊二醛喷雾消毒1次。定期采样、接种疫苗，观察并记录蛋雏鸡生长状态。30日龄试验结束。

1.2.3 血清制备

蛋雏鸡饲养至1、2、5、10、15、20、25、30日龄时，随机选取20只鸡采集血样。血液37℃恒温培养箱中静置20~35 min，待血清析出将血清转至1.5 mL离心管并标记，-20℃保存。

1.2.4 禽流感抗体效价检测

采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验进行禽流感抗体效价检测，严格按照高致病性禽流感诊断技术（GB/T18936—2020）标准实施。

1.2.5 判定标准

按照王孝德等[9]、张雪花等[10]、冯艳男等[11]研究方法和临床实践，禽流感HI抗体效价≥6 log2判定为合格，＜4 log2判定为不合格。

1.3 数据统计与分析

数据采用GraphPad Prism 7进行统计处理，结果以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 1日龄蛋雏鸡禽流感母源抗体与父母代蛋种鸡禽流感免疫抗体检测结果（见表1）

由表1可知，父母代蛋种鸡禽流感免疫抗体平均效价和抗体合格率均较高；1日龄蛋雏鸡的禽流感母源抗体平均效价均大于6 log2，群体抗体合格率为99%，可保护蛋雏鸡免受H5、H7亚型禽流感病毒的侵袭。

表1 1日龄蛋雏鸡禽流感母源抗体与父母代蛋种鸡禽流感免疫抗体检测结果Tab.1 Detection results of maternal antibody avian influenza in one-day-old layer chicks and parental layer breeder avian influenza antibody

2.2 不同日龄蛋雏鸡AIV H5亚型母源抗体效价（见表2）

由表2可知，H5亚型禽流感R-11、R-12母源抗体效价和群体抗体合格率均在2日龄时最高；5日龄时，H5亚型禽流感母源抗体平均效价和群体抗体合格率呈缓慢下降，但平均效价仍高于6 log2；7日龄时，其母源抗体平均效价和群体抗体合格率均急剧下降，说明鸡群已经面临禽流感的威胁。10日龄后，抗体在4 log2以下，表明H5亚型禽流感母源抗体已不能抵抗禽流感病毒侵袭；20日龄后，母源抗体平均效价和群体抗体合格率逐渐下降至0。

表2 不同日龄蛋雏鸡AIV H5亚型母源抗体效价Tab.2 Titer of maternal antibody of AIV H5 subtype in layer chicks of different ages

2.3 不同日龄蛋雏鸡AIV H7亚型Re-2母源抗体效价（见表3）

表3 不同日龄蛋雏鸡AIV H7亚型Re-2母源抗体效价Tab.3 Titer of maternal antibody of AIV Hsubtype Re-2 in layer chicks of different ages

由表3可知，蛋雏鸡H7亚型禽流感母源抗体效价和群体抗体合格率在2日龄时最高，为7.59 log2，之后随着日龄增加逐渐下降；5日龄时，H7亚型禽流感母源抗体接近抗体合格的临界值（6 log2）；7日龄以后，H7亚型禽流感母源抗体效价急剧下降至抗体保护效价（4 log2）以下，表明雏鸡已经处于禽流感病毒感染的危险期。

2.4 蛋雏鸡群禽流感H5、H7亚型不同日龄母源抗体间的关系（见图1、图2）

由图1可知，H5和H7亚型禽流感母源抗体效价下降趋势基本一致。2~7日龄，试验蛋雏鸡群母源抗体呈缓慢下降趋势；7~20日龄时，母源抗体下降幅度较大；20~30日龄，母源抗体均在2 log2以下。

由图2可知，2~7日龄时，试验蛋雏鸡群H5亚型禽流感母源抗体合格率在80%以上；10日龄后试验蛋雏鸡群母源抗体合格率急剧下降；20日龄以后母源抗体合格率在20%以下。5日龄前，试验蛋雏鸡群H7亚型禽流感母源抗体合格率在90%以上；5日龄后试验蛋雏鸡群母源抗体合格率急剧下降；20日龄以后母源抗体合格率在20%以下。

3 讨论

2013年起，我国出现多起H7N9流感病毒感染，对养禽业造成了巨大的损失，严重阻碍了行业的健康发展[12-14]。H5和H7亚型禽流感病毒引起的高致病性禽流感（HPAI）已被世界动物卫生组织列为一类动物疫病[15]。AIV不断变异，导致我国流行的AIV存在多血清型、多基因型、多致病性等特点[16]。但强制免疫能有效阻止禽流感在家禽和人之间的流行[17]。

本试验中，采用重组禽流感（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1Re-11株+Re-12株、H7N9Re-2株、H5N2）对父母代蛋种鸡进行免疫，监测蛋雏鸡H5和H7亚型禽流感母源抗体的消减规律。临床判定认为禽流感母源抗体≥6 log2时可完全保护，在4 log2时可获得大群保护。结果表明，蛋雏鸡H5、H7亚型禽流感母源抗体效价和群体抗体合格率在5日龄前均维持高水平，之后随着日龄增加而逐渐下降；7日龄后呈直线下降趋势。试验蛋雏鸡群H5亚型禽流感母源抗体水平在10日龄时处在4 log2以上，群体保护率70%以上；H7亚型禽流感母源抗体水平在10日龄时处在4 log2以下，群体保护率60%，表明试验蛋雏鸡群已经面临禽流感威胁。鸡群从接种灭活疫苗到产生抗体需要7~14 d，同时需避免母源抗体对疫苗免疫应答的干扰作用。结果表明，该种鸡场蛋雏鸡H5、H7亚型禽流感最佳首免时间应在7日龄为最佳。

李叔伟等[18]为了评估重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗（H5N1Re-11株、Re-12株、H7N9Re-2株）对白羽肉鸡免疫效果以及最佳免疫时间，选取3个厂家的重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗分别于1日龄和7日龄接种白羽肉鸡，结果表明，1日龄接种抗体效价要好于7日龄接种时产生的抗体效价。有条件的蛋鸡场可考虑将H5、H7亚型禽流感的首免时间放在1日龄，但建议先进行小群试验，再大群推广。

4 结论

建议该种鸡场H5、H7亚型禽流感的首免时间为7日龄，条件成熟后可考虑提前到1日龄。