禽腺病毒4型Fiber-2蛋白原核表达及间接ELISA的构建

潘静，孟凯，秦晓冰

（1.青岛农业大学动物医学院/山东省预防兽医学重点实验室，山东 青岛 266109；2.山东省农业科学院家禽研究所，山东 济南 250100）

2015年7月以来，以包涵体肝炎和心包内出现淡黄色透明液体为主要临床症状的“鸡心包积水综合症”（hydropericardium-hepatitis syndrome，HHS）在中国大面积暴发流行，该病是由禽腺病毒4型（fowl avianadenovirus serotype 4，FAdV-4）引起的急性传染病，对我国家禽绿色健康养殖构成巨大的威胁和挑战［1］。被FAdV-4感染的家禽出现急性死亡，死亡高峰集中在1周之内，死亡家禽出现典型的心包积液以及包涵体肝炎症状。此外，FAdV-4感染能够导致宿主的免疫抑制，由此导致的免疫失败、继发感染、混合感染进一步加剧了HHS的危害［2］。目前亟待有效检测该病毒的商业产品。FAdV-4包括3种主要结构蛋白，分别为纤突蛋白Fiber、六邻体蛋白Hexon和五邻体基座Penton［3］。其中FAdV-4的基因组中有2个Fiber基因开放阅读框，能够编码2个Fiber蛋白——Fiber-1和Fiber-2［4］。纤突蛋白Fiber-2和六邻体蛋白Hexon可作为免疫原性蛋白起到一定的保护作用，通过比较其保护效率发现Fiber-2蛋白的免疫原性和保护原性最好［5］。

血清学诊断技术已被用于家禽FAdV感染的检测，其进展主要集中在ELISA检测技术的改进上。早期间接ELISA采用全病毒作为包被抗原，但病毒抗原的制作繁琐、低效且灵敏度和特异性低。而基于重组蛋白的ELISA方法更灵敏、特异和准确，易形成标准化并适于大规模运用［6］。

本研究以从山东省某肉鸡场分离到的一株FAdV-4毒株（命名为FAdV-4 SDJN0105株，于2021年1月29日保藏于武汉大学菌种保藏中心，保藏号为CCTCC No：V202114）为模板扩增Fiber-2基因，通过原核表达Fiber-2蛋白作为包被抗原，优化反应条件，建立了FAdV-4间接ELISA抗体检测方法，丰富了当前检测FAdV-4的方法，为定量测定免疫鸡体内抗体水平提供了参考依据。……