EB1在小鼠神经系统中表达和功能

宋彬彬 甄 然 彭 宇 丁思妍 杨 璇 于 佳

微管是真核细胞中重要的骨架结构和胞内运输轨道，其散布于胞质中，对于维持细胞结构、形态和功能具有重要作用[1]。微管正端示踪蛋白可特异定位于微管正端，具有保守的特定序列和复杂的相互作用网络，参与调控微管的动态变化，影响细胞内微管依赖的各种生物学过程。微管末端结合蛋白1(end-binding protein 1，EB1)可自发的定位于微管正端，呈彗星状分布，能招募含特定序列的多种蛋白在微管正端的聚集，是形成微管正端示踪蛋白网络的中心分子[2,3]。近年来有报道显示口腔鳞状细胞癌患者中EB1过表达[4]。佩里综合征患者致病基因DCTN1的突变位点位于其与EB1相互作用结构域[5]。以上提示EB1含量和功能异常与多种疾病发生相关。本研究通过生化方法以1.5月龄野生型小鼠、成纤维细胞和HEK293细胞为材料，检测EB1在小鼠神经系统和细胞中表达和分布，以及EB1在细胞自噬通路中的作用。

材料与方法

1.主要仪器和试剂：siRNA转染试剂购自德国QIAGEN公司；10% SDS溶液、蛋白酶抑制剂、蛋白定量试剂盒、蛋白电泳预制胶、超声波细胞破碎仪、荧光标记二抗以及封片液购自美国Thermo Fisher Scientific公司；Turbo转印包、Trans-Blot Turbo转印系统购自美国Bio-Rad公司；鸡抗神经丝重链(neurofilament heavy chian，NFH)单克隆抗体、山羊抗p150glued多克隆抗体购自英国Abcam公司；鼠抗EB1单克隆抗体购自美国BD公司；兔抗EB1多克隆抗体、鼠抗β-actin单克隆抗体、兔抗GAPDH多克隆抗体购自美国Sigma-Aldrich公司；豚鼠抗p62多克隆抗体购自日本MBL Life Science公司；兔抗LC3B多克隆抗体购自美国Novus Biologicals公司；荧光标记二抗、Odyssey红外激光成像系统购自美国LI-COR公司。……