miR-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

巫梦雪 杜薇娜 王 曼 熊国平

卵巢癌是最常见的女性癌症类型之一，治疗手段主要包括手术治疗、放疗、免疫治疗、化疗[1]。尽管近年来卵巢癌的诊断和治疗得到了较大的发展，由于其淋巴结转移率很高，多数患者疗效不佳，5年生存率很低[2]。筛选合适的分子标志物和治疗靶点是监测和干预卵巢癌发生、进展的关键。微小RNA(miRNA)由18～25个核苷酸构成的内源性小分子RNA，在基因的转录过程发挥重要调控作用[3,4]。多项研究显示，恶性肿瘤组织和细胞中均存在miRNA差异表达，miRNA通过抑制抑癌基因或癌基因的翻译过程，影响肿瘤细胞的凋亡、迁移、耐药性、增殖等生物学行为[5,6]。miR-3614-5p属于miR-3614家族，是定性明确的抑癌基因[7,8]。Li等[7]研究发现，非小细胞肺癌组织中miR-3614-5p的表达水平降低，miR-3614-5p能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和转移。目前，有关miR-3614-5p在卵巢癌中的研究很少。本研究旨在探讨miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达，观察miR-3614-5p对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响，明确miR-3614-5p参与卵巢癌发生、发展的机制。

材料与方法

1.细胞与试剂：人卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3、A2780、HO-8910、OC3)和人正常卵巢上皮细胞IOSE80购自美国标准培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)。miR-3614-5p模拟物、miR-NC模拟物、双荧光素酶报告基因载体psiCHECK2(GNAI2-m、GNAI2-w)、PCR引物购自上海吉玛生物制药有限公司。一抗GNAI2、β-tubulin、p-AKT、RHEB、p-mTOR和辣根过氧化物酶标记的二抗均购自美国CST公司。CCK-8试剂盒购自美国Sigma公司。RPMI 1640培养基、DMEM/F12培养基、胎牛血清和BCA蛋白浓度检测试剂盒购自美国Amresco公司。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)相关试剂盒购自日本TaKaRa公司。Transwell小室购自美国Corning公司。Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司。……