鱼类肌肉组织18S rRNA 降解变化与死亡时间的关联性

杨阿敏，李彦彦，叶浩达，王亚军，严小军，陶 震

(1.浙江海洋大学水产学院，浙江舟山 316022；2.宁波大学海洋学院，浙江宁波 315211)

自我国实施了海洋伏季休渔制度以来，如何确定市售鱼类的死亡时间已成为了执法部门面临的一个难题。虽然鱼类死后，鱼体组织会发生形态、物理特征及化合物水平的变化，但目前尚未建立一些适用于鱼类死亡时间推断的检测指标。因此，寻找稳定、灵敏的检测指标是建立死亡时间确定方法的重点之一。

近年来，多项研究表明RNA 在法医学死亡时间推断中具有应用价值。例如，李文灿等[1]利用实时定量PCR(RT-qPCR)方法检测死后大鼠心肌组织中RNA 分子的含量变化，发现18s 与microRNA 分子miR-1-2d 的循环数阈值(Ct)的差值(ΔCt)与死亡时间存在相关性。朱怡等[2]采用类似的RT-qPCR 对RNA 分子进行定量分析，认为脑组织中β-actin mRNA 和18s 的时序性降解与死亡时间存在较好的相关性。INOUE,et al[3]采用类似的策略，检测了死后大鼠肝、心、肺组织中28S 核糖体RNA(28s)、18s 的变化规律，发现降解与时间呈线性关系，但降解速率存在组织特异性，这可能主要受组织内源性核糖核酸酶(RNase)酶活水平的影响[4]。这些研究揭示组织中的RNA 在一定环境条件下的变化具有一定规律性，组织内的RNase 酶活水平是决定其RNA 降解速率最重要的因素之一。这些发现成为了采用RNA 的时序性降解进行死亡时间推断的理论基础[5-7]。受这些研究的启发，本研究采用模式物种斑马鱼Danio rerio 为实验对象，在实验室内模拟鱼类在冷藏保存(0～1 ℃)过程中，分析鱼类肌肉组织中18s 降解规律，并建立了基于肌肉组织中18s 特定片长降解产物的丰度作为检测指标，推测冷藏条件下鱼类贮存时间的方法原型。……