氯膦酸二钠脂质体治疗膝关节骨性关节炎的疗效观察

陆锋艺 王雨 庄汝杰*

骨性关节炎（Ostereoarthritis，OA）是最常见的关节退行性疾病，临床上以严重的疼痛及肢体功能活动障碍为主要特点［1］，严重影响患者的生活质量。然而，OA的发病机制尚不明确，既往临床多责之于关节软骨，关于关节软骨的信号机制研究包括C5、hypoxia-inducible factor-2ɑ、syndecan-4、ADAMTS 等［2-5］。本研究通过建立小鼠膝关节骨性关节炎模型，并用氯膦酸二钠脂质体（Clodronate liposomes，CL）进行干预，观察膝关节破坏情况，以探讨氯膦酸二钠脂质体对膝骨关节炎的影响。巨噬细胞可吞噬注入人体内的氯膦酸二钠脂质体，消化脂质体释放氯膦酸二钠，在巨噬细胞内聚集达到一定浓度后，巨噬细胞失去活性并凋亡［6］。

1 材料与方法

1.1 实验动物、试剂与耗材 8 周龄雄性C57BL/6 小鼠，购自浙江中医药大学动物实验中心。氯膦酸二钠脂质体（LIPOSOMA，CP-005-005），帕瑞西布钠（MCE，HY-17474A），Collagen 2 抗体（Abcom，Ab34712），MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（Beyotime，C0009S），RAW264.7 小鼠单核巨噬细胞系（Procell，CL-0190），96 孔板孔细胞培养板（NEST），DMEM 培养基（gibco），特级胎牛血清（HYCLONE，SH30070.03）。

1.2 实验方法 SPF 级健康8 周龄雄性C57BL/6 小鼠30 只，随机均分为A（CL）组，B（帕瑞西布钠）组，C（空白对照）组，每组各10 只。A 组和B 组小鼠进行DMM 造模，建立小鼠KOA 模型，C 组不做处理。造模步骤参考WELCH 等［7］，术后4 周关节炎造模成功。在造模成功前1 周，A 组小鼠膝关节注射氯膦酸二钠脂质体（1 mg/mL）6μL，1 次，进行巨噬细胞耗竭。从术后第4 周开始，B 组小鼠关节腔注射帕瑞昔布钠（1 mg/mL）20μL，1 周2 次。C 组小鼠注射生理盐水20μL，1 周2 次。

1.3 检测指标 于造模后第4 周、第8 周获取小鼠膝关节标本，并采用4%多聚甲醛固定。置于10%甲醛溶液中固定48 h 后，经0.27 mol/mL EDTA-2Na 脱钙2 个月，每隔1 周更换脱钙液。脱钙后将膝关节石蜡包埋，从关节内侧边缘开始于矢状平面连续切片，进行常规HE 染色及Ⅱ型胶原免疫组化，比较各组膝关节软骨的病理变化。……