黄芪花对大鼠的致畸性评价

◎ 李 慧，李静辉，马德志，张可勇，崔 莹，刘吉成

（齐齐哈尔医学院 科研处黄芪产业研究院，黑龙江 齐齐哈尔 161006）

黄芪来源于豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.和蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge. var.mongholicus（Bge.）Hsiao，主产于我国黄芪主产区，包括甘肃、内蒙古、山西、黑龙江、河北等地[1]，颜色多为淡黄色，偶见粉色和紫红色[2]。黄芪花最早于《神农本草经》中记载就作为药用，主治月经不调、咳嗽、头痛和热毒赤目。现代研究也显示黄芪花可以很好地起到补血或活血化瘀的作用，长期代茶饮能很好地预防身体贫血等症状，说明黄芪花具有较好的药用价值。文献研究显示黄芪花含有多种生物活性成分，如黄酮类、皂苷类和多糖等，且黄芪花中的部分成分含量高于黄芪根中的含量。LI等[3]对黄芪花中的可溶性糖、可溶性蛋白、多种挥发性成分、核苷酸和17种氨基酸成分进行了检测，表明黄芪花含有多种活性成分。朱正兰等[4]检测了黄芪花和黄芪茎叶中的总皂苷含量，结果显示黄芪茎中的总皂苷含量是1.768 mg·g-1，而花中的总皂苷含量是21.842 mg·g-1，远远高于茎中的含量。姚天宁等[5]对黄芪花中的成分进行了分离，结果显示鉴定出8种皂苷和黄酮类成分，包括具有抗氧化活性较强的金丝桃苷和异槲皮苷。王桂臻等[6]对黄芪花中进行检测，结果发现黄芪花中含有6种黄酮类、2种皂苷类以及多种糖类和氨基酸成分。王昶等[7]采用紫外分光光度法，检测了黄芪花中的多糖含量，结果显示多糖含量为6 mg·g-1，表明黄芪花中含有较高的多糖含量。现代药理学研究显示黄芪花中的黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌、抗病毒、神经保护、降血糖和抑制黑色素生成等作用[8-9]，总皂苷类成分具有免疫调节、器官保护、抗病毒等药理作用[10-11]，黄芪多糖具有保护视网膜、改善记忆力、认知功能、抗衰老和抗骨质疏松等作用[12-14]。

黄芪花除作为药用来源外，还被用于长期食用，尤其在黑龙江大兴安岭、内蒙古、广东等地区长期做代茶饮使用。研究显示黄芪花中含有多种营养成分，李园等[15]对黄芪花中营养成分进行了检测，结果显示黄芪花中含有多糖类、水溶性蛋白质、果糖、葡萄糖、蔗糖以及6种核苷类和15种游离氨基酸类成分，另外检出8种脂肪酸类成分，为黄芪花的系统利用和深度开发提供了科学依据。目前，我国黄芪种植面积大、资源量丰富，黄芪花作为附加产品，不结荚年份常常自然凋谢浪费。作为有广泛应用前景的天然原料，其毒理学研究较少。李永[16]对黄芪茯苓制剂灌胃大鼠后的生殖毒性和胚胎致畸性进行了观察，结果显示复方黄芪茯苓制剂无明显致畸作用。朱玉平等[17]研究了黄芪甲苷对SD大鼠的致畸作用，结果表明黄芪甲苷为1.0 mg·kg-1剂量时对SD大鼠有一定母体毒性和胚胎毒性，但在受试剂量下无胎儿毒性，也无明显的致畸作用。由于黄芪花中含有黄芪甲苷等有效成分，因此，开展相关的致畸性试验对黄芪花的应用具有重要的指导意义。

1 材料与方法

1.1 原料

试验样品为蒙古黄芪与膜荚黄芪的花，呈淡黄色，少数为粉色，采收后自然条件下晾干。提取方法在胡志航等[18]的提取方法上进行了优化，具体方法如下：样品采用热回流的方式进行提取，水提设置为微沸条件下提取2次，每次2 h，提取后的残渣再进行醇提，条件为75%乙醇提取2次，每次2 h，将水提、醇提的过滤液合并后直接喷雾干燥成粉，得率为20%，主要有效成分有黄芪皂苷、多糖、黄酮类和氨基酸等成分。

1.2 试验动物

选择清洁级SD大鼠共210只，雌雄比为6∶1，体重为（200±20）g，生产和使用许可证号分别为SCXK（ 浙）2014-0001和SYXK（ 浙）2011-0166。基础饲料执行标准GB 14924—2010，饲养环境为室温20～25 ℃，相对湿度为40%～70%。

1.3 试验方法

1.3.1 剂量和分组

根据前期急性毒性实验结果，分别设干制黄芪花3.75 g·kg-1BW、7.50 g·kg-1BW、15.00 g·kg-1BW（相当于人体推荐量的75、150、300倍）低中高3个剂量组以及阴性对照组。按照前期样品提取率计算分别称取样品22.5 g、45.0 g、90.0 g加300 mL蒸馏水混匀保存在4 ℃冰箱中。

雌性大鼠与雄性大鼠以2∶1的比例同笼过夜，次日早晨阴道涂片见精子者确定为受精鼠，将受精鼠随机分为4组，并记录体重，受精当天确定为受孕0 d，每组不少于16只。

1.3.2 试验方法及观察指标

在雌鼠受孕后的第6 d开始，孕鼠按10 mL·kg-1BW灌胃容量于每天上午经口给予受试物，共给予10 d，于受孕的第0 d、6 d、9 d、12 d、15 d、20 d记录体重。第20 d处死母鼠并取出子宫，检查记录黄体数、活胎数、吸收胎及死胎数（用“n”代表数量）。逐个记录活胎鼠的体长、尾长、性别、体重以及是否发生畸形。将胎鼠的一半进行茜红素染色观察骨骼畸形，另一半浸入Bouins溶液观察内脏。

1.3.3 数据处理

计算各个观测指标的平均数、标准差、发生率等，采用SPSS 13.0软件进行数据处理，计量数据均采用t检验，计数数据采用卡方检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 对孕鼠体重的影响

试验期间各组孕鼠的摄食、饮水正常，体重增长良好，未出现中毒表现和体征，无死亡发生。受孕大鼠各时期的体重、增重及净增重与阴性对照组比较均无显著性差异（P＞0.05），结果见表1。

表1 干制黄芪花对孕鼠体重的影响表

2.2 对孕鼠生殖功能的影响

各组孕鼠之间的指标与阴性对照组相比无显著差异（P＞0.05），表明干制黄芪花对孕鼠生殖功能无影响，结果见表2。

表2 干制黄芪花对孕鼠生殖功能的影响表

2.3 黄芪花对胎鼠的影响

2.3.1 对胎鼠生长发育的影响

黄芪花饲喂孕鼠后，各剂量组胎鼠的身体指标与阴性对照组之间相比均无显著差异（P＞0.05），提示黄芪花对胎鼠的生长发育无有害影响，结果见表3。

表3 干制黄芪花对胎鼠生长发育的影响表

2.3.2 对胎鼠畸变的影响

3个不同剂量组与阴性对照组在脑外露、脊椎裂、腹外露、唇裂、无尾等指标方面均无畸形发生，表明黄芪花不引起胎鼠的畸形。在受检胎鼠中，内脏鼻腔充血、脑室充血、肾脏萎缩和上腭裂等均为0，说明黄芪花饲喂孕鼠对胎鼠内脏畸形无影响。在胎鼠胸骨缺失及囟门增大等畸形方面各组均有部分胎鼠发生，但各组与阴性对照组之间无差异，说明胸骨缺失及囟门增大畸形不是由黄芪花引起。结果见表4、表5、表6。

表4 干制黄芪花对胎鼠外观畸形的影响表

表5 干制黄芪花对胎鼠骨骼畸形的影响表

表6 干制黄芪花对胎鼠内脏畸形的影响表

3 结论与讨论

黄芪花作为天然绿色资源，长期作为食品原料进行应用，在大兴安岭、内蒙古、广州等国内多个地区用于做代茶饮，并研发出多款黄芪花食品[19-20]。近年来，关于黄芪花的研究主要集中在营养成分、药理作用等方面，而关于黄芪花的毒理学研究较少，尤其是致畸研究。在已有的黄芪毒理学研究方面，主要有少数研究集中在黄芪根、茎叶方面，目前的相关研究显示黄芪根和茎叶在实验剂量下未见对小鼠的毒害作用。随着人们生活健康水平的提升，天然的食疗保健产品逐渐受到更多的关注，科学合理地综合开发富含生物活性有效成分、氨基酸、维生素的黄芪花，使人们通过膳食方式提升免疫力，促进身体健康具有重要的现实和深远的社会意义。另外，由于黄芪花提取物含有的化学成分及含量与日常代茶饮相比更加丰富，能够全面揭示黄芪花对大鼠的致畸作用，因此利用提取物进行致畸试验具有较强的代表性。

干制黄芪花提取物的致畸试验结果显示未对孕鼠产生中毒影响，对胎鼠的身长、尾长等特征指标未产生显著差异性影响。各剂量组胎鼠的骨骼畸形和内脏畸形未出现相关影响，表明黄芪花提取物在本实验剂量条件下对大鼠无生殖毒性作用，对胎鼠无致畸效应。本研究结果与胡志航等[18]对黄芪的致畸性研究结果一致，表明黄芪花与黄芪在一定剂量条件下均无致畸效应。朱玉平等[17]显示黄芪甲苷在1.0 mg·kg-1剂量下具有一定母体毒性，但由于黄芪花中含有的黄芪甲苷含量较低，因此高剂量条件下未产生母体毒性，表明黄芪花的食用剂量应相对严格控制。