微小RNA-425-5p靶向调控PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的实验研究

高慧，王丽，王景华

宫颈癌是全球妇女中常见的第四大恶性肿瘤，给女性的身体健康和生活质量造成很大的威胁。认识和了解宫颈癌发生发展的分子机制是实现全面消除宫颈癌的第一步。既往研究显示，在宫颈癌中存在着异常表达的微小RNA（miRNAs/miR），而这些miRNAs 是宫颈癌病理进展过程的重要调节因子。研究发现，miR-425-5p在宫颈癌病人组织和血清中高表达，与病人临床分期、淋巴结转移等紧密联系，但miR-425-5p 在宫颈癌中的详细功能与机制仍未完全阐明。本研究于2018年10月至2019年10月考察miR-425-5p 在宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移中的作用，并探讨其潜在的分子机制，以期为宫颈癌发病机制的深入研究提供新的启示。

1 材料与方法

1.1 海拉细胞培养

海拉细胞（美国ATCC）采用含10% 胎牛血清（美国Gibco BRL 公司）的达尔伯克改良伊格尔培养基（DMEM 培养基）（美国Hyclone 公司）在常规条件为5% 二氧化碳、37 ℃的恒温培养箱（美国Thermo公司）中培养。

1.2 海拉细胞转染

在6 孔板中接种5×10个对数生长期的海拉细胞，常规培养至70%～80% 融合度时，参照转染试剂Lipofectamine2000（美国Invitrogen公司）说明书步骤进行瞬时转染。将转染miR-425-5p 模拟物（mimics）/抑制剂（inhibitor）（上海吉玛制药公司）的细胞作为miR-425-5p mimics/inhibitor 组，转染miR-425-5p mimics/inhibitor 阴性对照（上海吉玛制药公司）的细胞作为mimics/inhibitor-NC 组；转染pcDNA3.1-PTEN 过表达载体质粒（上海钦诚生物公司）的细胞作为pcDNA3.1-PTEN 组，转染pcDNA3.1 空载体质粒（上海钦诚生物公司）的细胞作为pcDNA3.1 组；转染PTEN 干扰序列siRNAPTEN（美国Santa Cruz Biotechnology 公司）的细胞作为siRNA-PTEN 组，转染siRNA-PTEN 阴性对照（美国Santa Cruz Biotechnology 公司）的细胞作为siRNANC 组。转染5 h 后，更换新鲜DMEM 培养基并维持48 h。

1.3 实时荧光定量PCR检测……