基于形态指标和转录组的小麦抗旱与耐盐相关性分析

2021-12-16 03:37盛雨婷生林山陆峻一赵爱菊李夕梅
山西农业科学 2021年12期
关键词:耐盐耐盐性抗旱性

盛雨婷,生林山,陆峻一,赵爱菊,李夕梅

(1.青岛农业大学农学院,山东省旱作技术重点实验室,山东省耐盐作物种质创新与利用工程技术研究中心,山东青岛 266109;2.东营青农大盐碱地高效农业技术产业研究院,山东东营 257000;3.河北省农林科学院粮油作物研究所,河北石家庄 050035)

小麦(Triticum aestivum L.)是我国第二大口粮作物,在保障国家粮食安全方面发挥着重要作用[1]。随着水资源日益短缺和土壤盐渍化日趋严重,小麦生产面临严重威胁[2]。干旱会导致小麦光合能力下降、代谢不均衡,最终抑制小麦生长[3]。盐胁迫会引起小麦细胞离子毒害、光合性能下降、生长发育停滞,严重影响小麦产量[4]。因此,抗旱耐盐小麦新品种的培育对保障小麦生产具有重要意义。

众所周知,抗旱耐盐指标的鉴选对抗旱耐盐品种的选育具有重要指导意义。胚芽鞘长度、茎秆内可溶性碳水化合物、叶片相对含水量、拔节期叶面积指数、根系干质量等形态指标均与小麦抗旱性关系密切[5-9];超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)等酶活性、丙二醛(MDA)含量、叶绿素含量及荧光参数、蛋白质和核酸含量、渗透调节能力等生理生化指标也与小麦抗旱性有着较为密切的关系[10-14]。发芽率、发芽势、幼苗存活率、胚芽鞘长、根长、苗高、第一片叶的生长速度、苗鲜质量、春季分蘖数等形态指标可以作为小麦耐盐性鉴定的有效指标[15-17];K+/Na+比、K+通量、液泡膜和液泡Na+/H+变化、质膜和液泡膜H+-ATPase 活性、细胞膜透性、叶绿素含量、气孔导度、SOD 酶活性、多胺含量、游离脯氨酸含量、羟脯氨酸含量、糖蛋白中糖分含量、甜菜碱含量等生理生化指标也可以作为鉴定小麦耐盐性的重要指标[18-24]。由于小麦抗旱性和耐盐性均是多基因控制的复杂数量性状,在衡量小麦抗旱耐盐性时需要将多种指标结合起来进行综合评定,比如隶属函数法[25]。

小麦旱盐胁迫下形态及生理生化性状的变化都受基因的转录调控,目前,高通量转录组测序技术已广泛应用于植物抗逆相关研究中。LIU 等[26]利用高通量转录组测序发现,14 560 个基因在小麦干旱胁迫前后发生差异表达;ZHANG 等[27]以小麦幼苗根系为研究材料,在全基因组水平上鉴定到36 804 个盐胁迫前后差异表达的基因。

有研究指出,干旱时土壤水分蒸发会导致地表盐分不断积累,使得地表土壤水分减少、盐分浓度增加,因此,干旱和盐害往往同时发生[28]。翁亚伟等[29]研究发现,旱盐复合胁迫下,小麦幼苗的生物量、叶面积、叶绿素荧光和净光合速率等均显著下降;华智锐等[30]研究发现,小麦胚芽鞘长度、发芽势和发芽率均随旱盐交叉胁迫的加剧而呈下降趋势,而SOD、POD 和CAT 活性先上升后下降。目前,旱盐复合胁迫对小麦影响的研究已有报道,但小麦抗旱性与耐盐性相关性的研究尚未见报道。因此,本试验以173 个小麦品种(系)为材料,采用20%PEG溶液(模拟干旱)和150 mmol/L NaCl 溶液(模拟盐害)分别处理种子,并于芽苗期测定其相对胚芽鞘长、相对根长、相对苗高、相对发芽率和相对鲜质量,利用综合隶属函数法计算各品种(系)的抗旱耐盐能力,然后结合高通量转录组数据分析抗旱性与耐盐性的相关性,以期丰富小麦抗旱耐盐性相关研究,为小麦抗旱、耐盐性品种选育提供理论参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

青麦6 号、德抗961、济南17、济麦229、鲁麦21、烟农24 等173 份小麦品种(系)[31]用于小麦抗旱耐盐形态鉴定指标数据的测定,抗旱耐盐小麦品种青麦6 号(国审麦2016027)用于旱、盐胁迫的转录组分析。

1.2 基于形态指标的小麦抗旱耐盐相关性分析

小麦材料的萌发与处理、抗旱耐盐形态指标的测定均采用文献[31]的试验方法;然后采用文献[32]的方法计算小麦受胁迫下的相对抗旱或耐盐系数;随后利用Microsoft Excel 2007 对所得相对抗旱(耐盐)系数进行统计分析;再采用隶属函数值进行品种(系)各发芽指标的抗旱和耐盐性综合评定,参考文献[31]进行;最后利用SPSS 22.0 软件计算抗旱性与耐盐性之间的相关系数,参考文献[31]。

1.3 小麦旱、盐胁迫的转录组测序及生物信息学分析

青麦6 号小麦幼苗的培养参考ZHANG 等[27]的方法进行,随后分别采用20%PEG 溶液和0.3%NaCl 溶液对其进行模拟干旱和盐胁迫处理,胁迫发生48 h 后叶片取样并迅速置于液氮中,取出后置于-80 ℃超低温冰箱保存备用。以正常生长条件的幼苗叶片作对照,每处理3 次生物学重复。RNA 的提取、建库、转录组测序、基因组比对、表达水平分析、GO功能富集分析等均参考ZHANG 等[27]的方法进行。

2 结果与分析

2.1 不同品种(系)小麦抗旱形态指标的统计分析及抗旱性综合评价

从图1 可以看出,旱胁迫下不同小麦品种(系)相对胚芽鞘长、相对根长、相对苗高的隶属函数值主要集中在0~0.49,分别占总数的73.99%、75.72%、99.42%;相对发芽率、相对鲜质量的隶属函数值主要集中在0.30~1.00,分别占总数的91.91%、93.64%。116 个小麦品种(系)(占总数的67.05%)的抗旱性综合隶属函数值在0.30~0.49;分别有27(15.61%)、23 个(13.29%)小麦品种(系)的抗旱性综合隶属函数值在0.20~0.29 和0.50~0.59,二者相差不多;分别只有2(1.16%)、5 个(2.89%)小麦品种(系)的抗旱性综合隶属函数值在0~0.19 和0.60~0.79。

2.2 不同品种(系)小麦耐盐形态指标的统计分析及耐盐性综合评价

由图2 可知,盐胁迫下不同小麦品种(系)相对胚芽鞘长、相对发芽率、相对鲜质量的隶属函数值主要集中在0.30~1.00,分别占总数的81.50%、89.02%、92.49%;相对根长、相对苗高的隶属函数值主要集中在0~0.49,分别占总数的80.92%、89.60%。98 个(占总数的56.65%)小麦品种(系)的耐盐性综合隶属函数值在0.30~0.49;57 个(32.95%)小麦品种(系)的耐盐性综合隶属函数值在0.50~0.59;分别只有8(4.62%)、10 个(5.78%)小麦品种(系)的耐盐性综合隶属函数值在0.20~0.29 和0.60~0.79。

2.3 小麦抗旱性、耐盐性各指标间的相关性分析

由表1 可知,干旱胁迫下相对胚芽鞘长、相对根长、相对苗高、相对发芽率、相对鲜质量隶属函数值两两间相关系数绝对值在0.04~0.36;各指标隶属函数值与抗旱综合隶属函数值间的相关系数在0.49~0.70,且均达极显著水平。盐胁迫下相对胚芽鞘长、相对根长、相对苗高、相对发芽率、相对鲜质量隶属函数值两两间相关系数绝对值在0.06~0.21;各指标隶属函数值与耐盐综合隶属函数值间的相关系数在0.46~0.56,且均达极显著水平。相对鲜质量、相对胚芽鞘长、相对苗高在旱盐2 种胁迫下隶属函数值相关系数分别达到0.50、0.52、0.63,且均为极显著水平;抗旱、耐盐综合隶属函数值间的相关系数为0.43,且达极显著水平。

表1 小麦抗旱性、耐盐性各指标间的相关性分析

2.4 小麦干旱、盐胁迫响应差异表达基因及功能注释的比较分析

从图3 可以看出,与非胁迫处理相比,胁迫处理下共鉴定到3 311 个上调和4 712 个下调表达基因(变化倍数≥2,FDR 值<0.01)。其中,干旱胁迫特异上调基因数为1 717 个,盐胁迫特异上调基因数为650 个,旱盐共上调基因数为944 个;干旱胁迫特异下调基因数为2 901 个,盐胁迫特异下调基因数为209 个,旱盐共下调基因数为1 602 个。随后,对差异表达基因进行GO 功能富集分析,显著富集的前20 个亚类结果显示,旱盐上调基因富集亚类相同的有18 个(图4-A、B),旱盐下调基因富集亚类相同的有19 个(图4-C、D),均包括分子功能(molecular_function)、生物学过程(biological_process)、代谢过程(metabolic process)、催化活性(catalytic activity)等功能亚类。

3 结论与讨论

3.1 采用隶属函数法综合评价小麦的抗旱性和耐盐性

隶属函数法属于模糊评价函数的概念[25],可基于多个指标对小麦抗旱、耐盐性进行全面而客观的评价[31,33-34]。本研究将每个小麦品种(系)各指标抗旱或耐盐指标的隶属函数值相加并取平均值,避免了使用单一指标进行评价的不准确性,评价结果更加科学、可靠。

3.2 基于形态指标的抗性鉴定结果小麦抗旱性和耐盐性的相关性

张会丽[35]应用主成分分析和隶属函数法对36 个玉米品种(系)的生理和农艺性状指标进行综合评价发现,部分耐盐碱性强的品种(系)其抗旱性也较强,但部分抗旱性强的品种(系)则对盐碱胁迫较为敏感,总体而言,抗旱性和耐盐碱性存在一定的相关性。本研究基于173 个小麦品种(系)形态指标的抗旱、耐盐性数据,采用隶属函数法综合评价小麦的抗旱耐盐性后进行相关性分析。鉴于统计学上认为,相关系数r 的取值范围是-1≤r≤1。当0<r≤1时,成正相关关系;当r=0 时,不相关;当-1≤r<0时,成负相关关系。r 的绝对值越大,相关程度越高。一般认为,0.8≤|r|<1,存在极强相关性;0.6≤|r|<0.8,强相关;0.4≤|r|<0.6,中度相关;0.2≤|r|<0.4,弱相关;0<|r|≤0.2,极弱相关性,或认为不相关。本研究结果认为,旱/盐胁迫下各形态指标间均为弱/极弱相关性,但是其与综合抗旱/耐盐性间的相关性达到中度及以上(相关系数为0.46~0.70);相对胚芽鞘长、相对鲜质量两指标在旱盐2 种胁迫间为中度正相关性(相关系数分别为0.52 和0.50),相对苗高在旱盐2 种胁迫间为强正相关性(相关系数达0.63)。鉴于综合隶属函数最能客观评价品种(系)的抗旱耐盐性,本研究发现,抗旱、耐盐综合隶属函数值间的相关系数为0.43,因此,本研究认为小麦的抗旱耐盐性间为中度正相关关系。因此,可以对筛选出的抗旱性(耐盐性)突出的小麦品种(系)进行耐盐性(抗旱性)鉴定,有望筛选到同时适用于旱地、盐碱地的既抗旱又耐盐的小麦品种(系)。

3.3 基于转录测序结果小麦抗旱性和耐盐性的相关性

干旱、盐胁迫48 h 小麦叶片高通量转录组测序结果显示,干旱、盐胁迫共上调基因数(944 个)分别占旱(2 661 个)、盐(1 594 个)胁迫上调基因总数的35.48%和59.22%,干旱、盐胁迫共下调基因数(1 602 个)分别占干旱(4 503 个)、盐(1 811 个)胁迫下调基因总数的35.58%和88.46%。说明小麦中很多基因是旱、盐胁迫双重响应的,在小麦抗旱、耐盐性中均发挥作用。如Tamyb59 在PEG 和盐处理下均呈现先上升后下降的表达趋势,该基因的过表达能够同时提高转基因小麦的抗旱性和耐盐性[36];TaHsfA6f 受高温、脱水、盐分、低温和多种激素的诱导表达,且拟南芥超表达株系较野生型株系表现出更强的抗旱性与耐盐性[37]。上述这些说明小麦抗旱、耐盐性的内在遗传机制有一定共性。差异表达基因的GO 功能富集结果显示,干旱、盐胁迫上调基因显著富集前20 个亚类相同的有18 个,干旱、盐胁迫下调基因显著富集前20 个亚类相同的有19 个。进一步说明小麦在应对干旱、盐胁迫逆境中,很大程度上采用了相似的调控机制。藏金萍[38]利用IR64/Binam 和特青/Binam 2 个导入系群体对水稻抗旱性、耐盐性进行分析,分别鉴定到5、3 个抗旱性QTL 与耐盐性QTL 相互重叠的基因组区域。鉴于不同作物间生长发育及应对胁迫的相似性,结合本研究结果,初步认为小麦抗旱性、耐盐性之间确实存在一定相关性,对抗旱、耐盐共响应基因进行有效的遗传操纵,或者对抗旱性、耐盐性QTL 重叠区进行有效的选择,有可能培育出既抗旱又耐盐的小麦新品种。

3.4 展望

鉴于芽苗期是小麦旱、盐胁迫最为敏感的时期,以及工作量等现实问题,本研究主要基于173 个小麦品种(系)芽苗期形态指标数据进行了小麦抗旱性、耐盐性间的相关性分析,为了使研究结果更加科学合理可信,应该结合生理生化指标、成株期鉴定指标及产量数据进行综合分析,但是本研究结果对小麦抗旱耐盐性研究仍有一定的指导意义。

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