沉默PROX1基因对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的影响

刘 菲,张晨曦,张苗苗,孙小莉,韩晨博,王 佳

(1.宝鸡市妇幼保健院病理科,陕西 宝鸡 721000；2.宝鸡市妇幼保健院综合外科,陕西 宝鸡 721000；3.西安市人民医院病理科,陕西 西安 710000)

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)在甲状腺癌中最为常见。随着外科技术及放化疗技术的发展,PTC患者的10年生存率可达74%～95%,但是复发和远处转移仍然是PTC患者死亡的主要原因[1]。因此,寻找潜在的PTC分子生物学标志物是临床及基础研究的重点。

prospero相关同源异形盒蛋白1(prospero-related homeobox 1,PROX1)是果蝇的同源异型盒基因prospero在哺乳动物中的同源框基因转录因子,在淋巴管的形成和发育中发挥重要作用[2]。越来越多的研究证实,PROX1在脑胶质母细胞瘤、乳腺癌和肝细胞癌等肿瘤组织中高表达,并参与肿瘤的发生发展[3-5]。Notch1是PROX1下游的信号通路[6],在PTC的发生发展中起重要作用[7]。TPC-1是甲状腺乳头状癌细胞,在PTC体外研究中应用广泛[8]。为了探索PROX1在PTC中的表达及意义,本研究检测PTC细胞系TPC-1、BCPAP、K1、IHH4中PROX1的表达,利用RNA干扰技术抑制TPC-1细胞中PROX1的表达,观察TPC-1细胞增殖、侵袭、凋亡及Notch1信号通路相关蛋白表达水平的变化。

1 材料与方法

1.1 材料和仪器

PTC细胞系BCPAP、TPC-1、K1、IHH4和正常甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-ori-3-1均购于中科院上海细胞库,DMEM培养基和胎牛血清购于南京生航生物技术有限公司,质粒由上海吉凯基因科技有限公司设计并提供,LipofectamineTM2000转染试剂盒购于美国Promega公司,CCK-8试剂盒、Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒和Transwell小室均购于上海沪震实业有限公司,PROX1、hes1、hes5、NICD和GAPDH抗体均购于美国Sigma公司。仪器：IX71型倒置显微镜(奥林巴斯,日本)、680型酶标仪(Bio-Rad,美国)、AlphaImager Mini型凝胶成像仪(ProteinSimple,美国)、FACSCanto Ⅱ型流式细胞仪(BD,美国)。……