创伤弧菌溶细胞素噬菌体单链抗体库的构建

潘振 陈杰敏 胡成进

创伤弧菌是分布在江河、沿海水域的革兰氏阴性杆菌。人通过生食或食用未经煮熟的海产品如牡蛎等而受感染,可引起急性胃肠道症状和原发性创伤弧菌性脓毒症[1]。还可由伤口暴露于含创伤弧菌的因素而直接受到感染,如清洗海鲜受伤及水上作业,导致严重肌炎,坏死性筋膜炎[2-3]。尤其对患有肝病及血液系统疾病等免疫力低下人群更易受到感染。很快引起感染性休克,多死于菌血症和多脏器功能衰竭[4-5]。

该病发病凶险,病死率高。在欧美、日本及我国沿江海水域感染时有发生。一份423例创伤弧菌伤口感染患者报道中[6],10%患者需要进行某种类型的截肢。在食源性患者病例中[7],创伤弧菌脓毒症病死率最高(39%),且在就诊时存在低血压患者死亡率则超过90%。因此,患病后及时有效诊断是创伤弧菌感染治疗及预后的关键。而临床常规培养鉴定方法繁琐,耗时较长,难以满足临床需求,故而建立及时有效的诊断方法迫切需要。

溶细胞素是创伤弧菌感染后分泌胞外的唯一外毒素,且序列保守,具有种属特性[8]。既往研究证明[9],溶细胞素具有溶细胞毒性和细胞毒作用,是引起细胞组织损伤的主要毒力因子,在创伤弧菌感染中发挥重要作用。

抗体基因工程技术快速发展,使单克隆抗体制备更加高效便捷,依据单克隆抗体特异性高、稳定好特点,可应用于病原体的快速诊断。用噬菌体展示技术构建鼠源性的单链抗体库,可大量获取针对溶细胞素的高特异性和均一性的单链抗体(single chain variable fragment antibody, scFv)[10]，对感染快速检测及免疫治疗具有重大意义。……