益气解毒方水提物对人结肠癌HCT-116细胞凋亡及其NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响

罗欢 魏行云 刘灵 邹攀 何迎春 江志超

〔摘要〕 目的 研究益气解毒方水提物对结肠癌HCT116细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、生存素（Survivin）和NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（1，0.5，0.25，0.125 g·L-1）益气解毒方水提物对HCT116细胞活性的影响;采用Hoechst 33342 染色法及流式细胞术检测其对HCT116细胞凋亡的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测其对HCT116细胞凋亡相关蛋白Bax、XIAP、Survivin及NF-κB通路相关蛋白NF-κB、IκK、IκB的影响。结果 MTT结果提示益气解毒方水提物能抑制HCT116细胞活性，呈时间-剂量关系（P<0.01）;与对照组比较，Hoechst 33342染色及流式细胞术结果显示益气解毒方水提物处理后，凋亡率升高（P<0.01）;XIAP、Survivin表达下降（P<0.01），Bax表达上升（P<0.05，P<0.01），NF-κB、IκK、IκB表達均下降（P<0.05，P<0.01）。结论 益气解毒方水提物可抑制结肠癌HCT116细胞增殖，诱导其凋亡，其机制可能与抑制NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB、IκK、IκB表达，下调XIAP、Survivin表达，上调Bax表达有关。

〔关键词〕 益气解毒方;结肠癌;NF-κB;信号通路;细胞凋亡

〔中图分类号〕R273       〔文献标志码〕A        〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.12.008

Effect of Aqueous Extract of Yiqi Jiedu Formula on Human Colon Cancer HCT-116 Cells Apoptosis and NF-κB Signaling Pathway Related Protein Expression

LUO Huan1， WEI Xingyun1， LIU Ling1， ZOU Pan1， HE Yingchun2，3， JIANG Zhichao3，4*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Hunan Provincial Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Ophthalmology and Otolaryngology Diseases with Traditional Chinese Medicine， Changsha， Hunan  410208， China; 3. Hunan Provincial Ophthalmology and Otolaryngology Diseases Prevention and Treatment with Traditional Chinese Medicine and Visual Function Protection Engineering and Technological Research Center， Changsha， Hunan 410208， China;

4. Hunan Provincial Brain Hospital， The Second People’s Hospital of Hunan Province， Changsha， Hunan 410007， China）

〔Abstract〕 Objective To investigate the effect of aqueous extract of Yiqi Jiedu Formula on colon cancer HCT116 cells apoptosis and B-cell lymphoma-2 related X protein （Bax）， X-linked inhibitor of apoptosis protein （XIAP）， Survivin and the influence of NF-κB signaling pathway related protein expression. Methods The thiazole blue （MTT） colorimetric method was used to detect the effect of different concentrations （1， 0.5， 0.25， 0.125 g·L-1） of aqueous extract of Yiqi Jiedu Formula on the cell viability of HCT116; Hoechst 33342 staining method and flow cytometry were used to detect its effect on HCT116 cell apoptosis; Western blot was used to detect its effect on HCT116 cell apoptosis-related proteins Bax， XIAP， Survivin and NF-κB pathway related proteins NF-κB， IκK， IκB. Results Aqueous extract of Yiqi Jiedu Formula could inhibit the activity of HCT116 cells in a time-dose relationship （P<0.01）. Compared with the control group， Hoechst 33342 staining and flow cytometry results showed， after treatment with aqueous extract of Yiqi Jiedu Formula， the apoptosis rate increased （P<0.01）; the expression levels of XIAP and Survivin decreased （P<0.01）， the expression levels of Bax increased （P<0.05， P<0.01）， the expression levels of NF-κB， IκK and IκB decreased （P<0.05，

P<0.01）. Conclusion Aqueous extract of Yiqi Jiedu Formula can inhibit the proliferation of colon cancer HCT116 cells and induce their apoptosis. The mechanism may be related to inhibiting the expression of NF-κB signaling pathway related proteins NF-κB， IκK and IκB， down-regulating the expression of XIAP and Survivin， and up-regulating the expression of Bax.

〔Keywords〕 Yiqi Jiedu Formula; colon cancer; NF-κB; signal pathway; apoptosis

结直肠癌（colorectal cancer， CRC）已成为临床上最常见的消化道恶性肿瘤之一，癌症患者致死率在世界范围内位列第二[1]。尽管目前在手术、化疗、放疗以及靶向治疗等治疗手段上取得一定进展，但放化疗的毒副作用、耐药性，靶向药物的安全性等问题仍未解决，故寻找安全、有效、不良反应小的治疗药物是结直肠癌治疗中亟待解决的问题。益气解毒方是田道法教授多年实践的经验用方，由黄芪、黄连、党参、白花蛇舌草、天花粉、茯苓、甘草组成，具有益气解毒、扶正祛邪、生津润燥之功效，能有效抑制体内鼻咽癌瘤体的生长[2]，延长患者生存期，提高患者生存质量。……