小鼠肝炎病毒感染对shh等基因改造小鼠生殖性能的影响及其相应净化方案

关升起*

（苏州大学实验动物中心 江苏·苏州 215123）

小鼠肝炎病毒（Mousehepatitisvirus，MHV）属于冠状病毒科，冠状病毒属，为单股RNA病毒，是已知冠状病毒中体积最大的一个。其病毒粒子呈球形，外有囊膜，外包膜突起呈放射状排列。根据不同的感染嗜性，小鼠常可分为呼吸株和嗜肠株两型，其中，嗜肠株极少扩散至其他组织，而呼吸株可在肝脏与神经系统中复制。多数情况下，MHV呈隐性感染，但在应激因素刺激下，可引发严重肝炎及神经症状，并发展成为急性致死性疾病[1]。

目前，国内外均鲜见关于MHV感染影响生殖系统功能的报道，但经过连续8年对苏州大学外来隔离检疫及委托人工辅助生殖小鼠的情况进行分析，发现MHV感染显著影响部分基因改造小鼠的生殖系统功能。由于MHV可通过胎盘将病毒从母体向胎鼠垂直传播，本研究利用小鼠受精3.5天前胚胎外层完整的透明带的屏障作用，对患病小鼠采用体外受精+胚胎移植的方法进行净化。结果表明，净化得到的小鼠，其生殖系统功能可恢复至与同背景野生型的平均水平。

1 材料与方法

1.1 实验动物

委托我中心进行隔离检疫及净化保种的基因修饰实验小鼠；购自上海斯莱克实验动物有限公司的ICR雄鼠、C57BL/6J供卵小鼠、ICR代孕雌鼠。

1.2 主要试剂

孕马血清促性腺激素（PMSG）和绒毛膜促性腺激素（HCG）购自宁波三生；自配输卵管液培养试剂（HTF）；Mouse hepatitis virus (MHV)Elisa kit试剂盒购自XpressBio公司。

1.3 主要仪器

二氧化碳培养箱（Thermo）、体视显微镜（OLYMPUS）、倒置荧光显微镜（OLYMPUS）、相位差显微镜（Leica）、生物显微镜温控仪（南京凯尔）、冰箱（海尔）、精密电子天平（上海舜宇）。……