痰湿型PCOS大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能及Nox1/p-Akt/Glut4信号通路变化的研究❋

丛培玮， 张丽娜， 陈文娜， 尚 冰， 吴兆利

(1.辽宁中医药大学教学实验中心， 沈阳 110847；2.辽宁中医药大学医学检验学院， 沈阳 110847；3.辽宁中医药大学医史文献研究院， 沈阳 110847；4.辽宁中医药大学针灸推拿学院， 沈阳 110847)

现代中医认为，痰湿阻络可诱发机体糖脂代谢异常，也是痰湿型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)患者胰岛素抵抗发生的重要原因之一[1]。卵巢颗粒细胞(granulosa cells, GCs)是卵泡的重要组成细胞，GCs通过缝隙连接和旁分泌因子为卵泡卵母细胞的发育和成熟提供能量支持[2]。线粒体是细胞的“动力工厂”，在卵泡发育周期过程中，GCs线粒体通过合成大量腺嘌呤核苷三磷酸(adenine triphosphate, ATP)为卵泡发育成熟提供能量[3，4]。过量脂沉积诱发的氧化应激会损伤GCs线粒体氧化功能，由此引发机体糖脂代谢异常，是影响排卵前卵母细胞质量的重要原因。本研究在前期实验基础上，从痰湿型PCOS大鼠GCs线粒体功能及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NADPH oxidase1, Nox1)/磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B, p-Akt)/葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter protein 4, Glut4)信号通路变化两方面，探讨痰湿型PCOS卵泡发育异常和闭锁的可能发生机制，丰富“痰湿不孕”的科学内涵。本研究已通过辽宁中医药大学动物实验伦理委员会审核，批准号2019YS(DW)-035-01。

1 材料

1.1 动物

SPF级健康雌性SD大鼠42只，体质量85～105 g，4～5周龄，由辽宁中医药大学动物实验中心提供，许可证号SCXK(辽)-2010-0001。实验动物饲养于辽宁中医药大学SPF级动物中心，自由摄食与饮水，饲养环境温度(20±2) ℃，湿度(50±5)%。

1.2 主要试剂与仪器

DMEM/F12培养基(货号SH30023)，HyClone公司；青链霉素(货号P1400)，北京索莱宝公司；10%胎牛血清(货号SH30070)，Bio-HyClone公司；孕马血清促性腺激素(货号P9970)，天津正江科技有限公司；……