ASFV、CSFV、PRRSV 多重荧光PCR检测方法的建立与应用

牛伟杰，于学祥，高 宇，库旭钢，何启盖,3*，罗 锐*

(1.华中农业大学 动物医学学院，湖北 武汉 430070；2.华中农业大学 农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070；3.华中农业大学 动物疫病诊断中心，湖北 武汉 430070)

非洲猪瘟(ASF)是一种烈性传染病，可引起感染猪较高的死亡率，对世界各国养猪业造成了巨大的经济损失。而自2018年ASF传入我国以来，目前流行形式依然严峻。非洲猪瘟病毒(ASFV)感染可引起患病猪体表及内脏广泛的出血和水肿，并可导致100%的死亡率[1]。经典猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)同样是目前严重损害我国及世界生猪养殖产业的常见传染性病毒病。CSF在猪群中扩散后发病率高达 80%～100%，皮肤出血、高烧，厌食，胃肠道症状，全身无力和结膜炎等均是CSF感染的表现。PRRS可导致发病猪的耳朵及其他部位皮肤发绀，因此得名“猪蓝耳病”[2]。我国《国家中长期动物疫病控制规划(2012—2020年)》要求到2020年优先对种猪场实行CSF、PRRS的净化，并逐步推行至对全国范围的猪场。

在不同规模化养猪场中，ASF、CSF、PRRS等疾病不仅严重影响经济效益，且感染猪临床症状的高度相似性，使得养殖技术人员难以通过病猪表现进行鉴别[2-3]。而多重检测方法，高效的鉴别诊断则提供了有力支持，同时简化操作步骤、降低实验污染风险、节约样品、试剂成本以及试验时间，可为临床疾病检测提供更高效的服务[4]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞、病毒和疫苗毒株 猪瘟病毒疫苗毒株(HCLV)及疫苗稀释液购于武汉科前生物股份有限公司；猪繁殖与呼吸综合……