西维来司他对急性肺损伤小鼠NLRP3炎症小体的作用研究*

韩艳奇，高志丹，陈清杰，黄翠萍

(1.湖北科技学院药学院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院糖尿病心脑血管湖北省重点实验室；3.湖北科技学院护理学院)

西维来司他(sivelestat，SV)是一种选择性中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，已被报道对内毒素诱导的仓鼠、豚鼠和绵羊肺损伤有效[3-4]。在日本进行的Ⅲ期和Ⅳ期研究显示[5-6]，SV能缩短患者机械通气时间和重症监护病房的停留时间，延长急性肺损伤患者的生存期。但SV与NLRP3炎症小体的关系研究甚少，本研究通过脂多糖LPS复制急性肺损伤小鼠模型，检测肺组织NLRP3炎症小体及其相关信号分子的表达变化，探讨SV对急性肺损伤小鼠肺组织的作用和机制。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 主要试剂与动物

32只7周龄雄性C57BL/6小鼠，体质量为22～26g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司。LPS购自北京索莱宝科技有限公司(L8880-10mg)；OLT 1177购自上海易汇科技有限公司(HY-W011082)；SV购自上海易汇科技有限公司(HY-17443)；ELISA试剂盒购自武汉赫尔生物科技有限公司(SU-BN20174)；NLRP3抗体购自CST(15101S)；CASPASE-1购自ABclonal(A0964)；p-NF-κB抗体购自ABclonal(AP0123)；NE(ELANE)购自ABclonal(A13015)；IL-18购自Immunoway(YN1926)；IL-1β购自Immunoway(YT2322)；β-actin抗体购自ABclonal(AC026)；BCA蛋白定量试剂盒，购自上海翊圣生物科技有限公司。

1.1.2 仪器

水平摇床(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；电泳槽、电转膜仪(Bio-Rad公司)；多功能酶标仪(美国Bio-Tek 公司)；化学发光凝胶成像系统(Bio-Rad公司)；研磨仪(武汉塞维尔生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物模型与实验分组

将32只C57BL/6小鼠在标准动物饲养间内，给予无菌水和食物饲养一周，随机分为4组(每组8只)：正常对照组(CON)、模型组(LPS)、模型+SV组(LPS+SV)、模型+NLRP3抑制剂组(LPS+OLT)。正常对照组腹腔注射生理盐水(20mg/kg)；……