基于p54的非洲猪瘟抗体胶体金检测方法建立

戴建华，王豪伟，张紫菡

（江苏农牧科技职业学院，泰州 225300）

非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）引起的猪的一种烈性、高度接触性传染病，对全世界养殖业造成了严重威胁[1-2]。2018年8月起，疫情从沈阳暴发，并不断扩散、蔓延至全国，给全国造成了巨大经济损失，严重影响了养猪业的健康发展。及时的检测可有效降低经济损失。目前ASF的检测，主要有基因检测、病原检测和抗体检测[3]。其中前两者对急性型ASF的敏感性较高，是ASFV早期感染检测的金标准，但需要在特定实验室、特定条件下开展，不适用于现场应用[4-6]。ASFV感染猪的抗体效价可以反映受感染动物的生存时间，而且抗体检测法相比前两种检测方法，也更加方便、廉价、快速，可用于大规模流行病学调查和无症状感染猪的筛查。

ASFV是线性双股DNA病毒，基因组长为170～193 kb，可编码包括p72、p54、p12等在内的50多种病毒结构蛋白，这些蛋白大都与病毒吸附、毒力、细胞凋亡及免疫应答相关[7-9]。p54蛋白是研究较多的蛋白之一：Kollnberger等[10]率先使用康复猪筛选到p54等14种蛋白可以产生抗体反应蛋白；曹琛福等[11]用原核表达的p54蛋白作为包被原建立了竞争ELISA检测方法；Tesfagaber等[12]建立了基于p54单克隆抗体的竞争性酶联免疫吸附试验（competitive enzyme-linred immunosorbent assay，cELISA）；Reis等[13]发现p54等12种蛋白能引发强的IgG应答，使用p54蛋白检测既能检测到IgG反应又能检测到IgM；Gallardo等[14]用原核系统表达的p54、pK205R、pB602L、pA104R这四种蛋白建立了ELISA抗体检测方法，研究发现与OIE推荐的方法相比较，前三者检测效果更好；张鑫宇等[15]建立了基于p54的抗体胶体金试纸检测方法。……